药品微生物限度检查法知识讲稿.pptVIP

大肠埃希菌检验程序 供试品→ 供试液　 　　  ↓ 不少于100ml的 胆盐乳糖增菌液 　 ↓35~37℃　18~24h 取 0.2ml ↓ 5mlMUG培养基中 　 ↓35~37℃　5、24h 366nm紫外光下观察 ↓ 加靛基质试剂 ┌────────────┐ MUG阳性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阴性 MUG阳性，靛基质 阴性 ↓　　　　　　 ↓取胆盐乳糖培养液划线 报告 曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板 ↓36±1℃　18~24h ┌────────────┐ 阳性 阴性 　 ↓　　　 ↓ 镜检、适宜的生化试验 报告 ↓　 报告 * * 注意事项 配制MUG培养基时，务必校正pH值 ，灭菌后pH不得过7.4否则pH值偏高，MUG分解本身则显荧光。 供试品培养液接种于MUG培养基中，培养时间一般在4h、24h观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，可延长培养时间至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的GUD的活性不完全相同，对底物和底物的浓度反应的差异；培养基中选择因子的影响；培养时间、温度；pH的改变；大量竞争菌和样品本身物质成分的干扰等，对结果的判断亦有影响。 * * 注意事项 观察供试品MUG管时，可与阳性对照管、阴性对照管同时在366nm紫外灯下观察。 在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上生长的可疑菌落，务必挑选2-3个以上菌落分别做IMViC试验鉴别。 在IMViC试验中，以灭菌接种环沾取菌苔，首先接种于枸椽酸盐琼脂斜面上，然后再接种于蛋白胨水等其它培养基上，切务将培养基带入枸椽酸盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。 * * 大肠菌群 大肠菌群作为水质粪便污染的指示菌已有80多年历史。大肠菌群的定义：是指37℃生长时能发酵乳糖，在24h内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，符合上述定义的细菌除大肠埃希氏杆菌属外，还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属等，实际上基本包括人和了正常家畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，较大肠埃希菌更具代表性，且存活时间较长。故检出大肠埃希菌，一般认为药品受粪便的近期污染；而检出大肠菌群，则表示药品受粪便的近期或远期污染。以大肠菌群作为口服药品微生物限度标准的控制菌，具有广泛的卫生学意义，更能反映药品的卫生质量。 * * 操作方法 取乳糖胆盐发酵管3支，分别加入1:10供试液1ml (供试品量0.1g或0.1ml), 1:100供试液1ml(供试品量0.01g或0.01ml),1:1000供试液1ml（供试品量0.001g或0.001ml），同时作阴性对照，各管置36±1℃培养18-24h, 阴性