当归多糖诱导HaCaT细胞凋亡的试验研究.doc

当归多糖诱导HaCaT细胞凋亡的实验研究 于春水(，牟韵竹，熊芬，丁小洁，陈燕，陈星 川北医学院附属医院皮肤科，四川 南充 637000 [摘要] 目的 从细胞凋亡的角度探讨当归多糖抑制HaCaT细胞增殖的机制。方法 用细胞体外培养技术、台盼蓝拒染法与流式细胞术检测APS对HaCaT细胞增殖的影响，电镜观察细胞形态变化。结果 细胞生长曲线显示25～2500mg/L的当归多糖对HaCaT细胞有显著抑制作用，且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250mg/L作用后S/G2+M期HaCaT细胞数减少，G0/G1期细胞增多。结论 APS对HaCaT细胞的增殖具有显著抑制作用，APS通过阻止HaCaT细胞进入S期而抑制其DNA合成。 [关键词] 当归多糖；HaCaT细胞；细胞凋亡 [中图分类号] R733.7 [文献标识码] A [文章编号] Empirical study of angelica polysaccharide inducting apoptosis of HaCaT cells YU Chunshui, Mou Yun-zhu, et al (Department of Dermatology, Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Nanchong 637000, China) Abstract：Objective It is to discuss the mechanism of angelica polysaccharide (APS)inhibiting proliferation of HaCaT cells from the angulation of apoptosis．Methods ：Techniques of cell culture were used in this experiment．The effect of APS on proliferation of HaCaT cells were examined by trypan blue staining and flow cytometry．The change of cell form was observed by scanning electron microscope．Results Cell growth curve showed 25～2500mg/LAPS had significant inhibition action on HaCaT cells and the relation was dose dependent．Flow cytometry result showed after 250mg/L APS given，the S phase and G2+M phase HaCaT cells decreased and the Go/G1 phase HaCaT cells increased．Conclusion APS can significantly inhibit proliferation of HaCaT cells．APS inhibits its DNA synthesis through preventing HaCaT cells to enter S phase． Key words：angelica polysaccharide；HaCaT cells; cell apoptosis 当归是祖国传统医学的“补血”要药，当归多糖(Angelica polysaccharide，APS)中药当归的提取物，具有明显改善微循环及防止心、肝、肾等缺血与再灌注损伤及保护血管内皮的作用[]，近年来国内外研究发现其具有较好的双向免疫调节作用[2]及抗肿瘤[3]作用。本项研究以HaCaT细胞为对象，进一步探讨APS对其增殖与细胞凋亡的影响，旨在为APS的临床用药和药物开发提供理论及实验依据。 1 材料和方法 1.1 材料 HaCaT细胞株（湖南湘雅细胞库），APS由我院药理教研室提供，纯度950mg/g以上，DMEM培养液配成1g/L的工作液，过滤除菌。APS在使用时用培养液稀释为0.1%(V/V)，以不影响细胞的生长。碘化丙啶(PI)购自Sigma公司，RNA酶为晶美生物工程有限公司，其他试剂由实验室常规配制。 1.2 细胞增殖影响的检测 采用台盘蓝拒染法，取对数生长的HaCaT细胞，调整细胞浓度为1xl05个/ml，实验组加入APS终浓度为25～2500 rng/L，对照组加入等量培养液，常规培养。分别在培养第2、4、6d取样，进行台盼蓝染色