酶工程-第七章.ppt

第七章 酶的发酵生产 第一节 酶的生产方式 第二节 产酶工艺条件及其调节控制 第三节 微生物发酵产酶 第四节 植物细胞物发酵产酶 第五节 动物细胞发酵产酶 酶的生产是指通过各种方法获得人们所需酶的技术过程。 酶的生产是酶工程的首要任务，只有通过生产获得酶以后，才有可能进一步进行各项酶学研究，也才有可能进行酶的改性和酶的应用等。 作业题 1、如何控制微生物发酵产酶的工艺条件？ 2、提高酶产量的措施主要有哪些？ 3、酶的生物合成有哪几种模式？ 4、植物细胞产酶有何特点？ 5、简述植物细胞培养的工艺条件及其控制。 6、动物细胞产酶有何特点？动物细胞培养方式有哪些？ (三)固定化细胞生长和产酶动力学 参照前节 1、固定化细胞生长动力学 2、固定化细胞产酶动力学 3、固定化细胞连续产酶动力学 五、固定化原生质体发酵产酶 固定化原生质体是指采用各种方法固定在载体上，在一定的空间范围进行生命活动的原生质体。 固定化原生质体有利于氧气和其他营养物质的传递和酶的分泌，可以显著提高酶产率。 固定化原生质体发酵产酶具有操作稳定性和保存稳定性。工艺条件控制需要注意： 1、渗透压的控制； 2、防止细胞壁再生； 3、保证原生质体的浓度。 第四节 植物细胞培养产酶 植物细胞培养是从植物外植体中获得植物细胞，然后在一定条件下进行培养，以获得各种所需产物的技术过程。 植物细胞培养培养产酶是20世纪80年代发展起来的技术，通过诱导从外植体获得植物细胞，再经筛选、诱变、原生质体融合或基因重组选育优质产酶细胞，在人工控制条件的反应器中进行培养产酶。 植物细胞产酶同样具有提高产率、缩短周期、提高产量等显著优点，且不受地理环境和气候条件的影响，具有深远的意义和广阔的应用前景。 一、植物细胞的特性 1、植物细胞较大（直径和体积） 2、生长速率和代谢速率较低，生产周期较长 3、营养要求简单 4、培养需要一定的光照强度和时间 5、对剪切力敏感 6、生产的产物不同于其它细胞培养 二、植物细胞培养的特点 1、产率高 2、周期短 3、易于管理，劳动强度低 4、产品质量高 三、植物细胞培养的工艺条件及其控制 1、温度的控制 室温下（25℃）培养，范围应控制在20~32 ℃。 温度高有利于细胞生长，温度低有利于次级代谢产物的积累。 2、pH的控制 最适pH=5~6，在配制培养基时，应将培养基控制在pH=5.5~5.8。 植物细胞培养过程中，pH变化较小。 3、溶解氧的调节控制 植物细胞代谢较慢，需氧量较小，过量的氧具有不良影响。另外植物细胞体积较大，对剪切力敏感，强烈的通风和搅拌会破坏植物细胞。 4、光照的控制 光照对植物细胞培养有重要影响。大多数植物细胞的生长以及次级代谢物的生产要求一定波长的光的照射，并对光照强度和时间有一定的要求。 有些次级代谢物的生物合成会受到光的抑制。 5、前体的添加 前体是指目的代谢物代谢途径上游的物质。 在培养过程中添加前体物质可以有效的提高次级代谢物的产量。 6、刺激剂的应用 刺激剂可以促使植物细胞中的物质代谢朝着某些次级代谢产物生成的方向进行，提高次级代谢产物产率的提高。 常用的刺激剂有微生物细胞壁碎片和果胶酶、纤维素等微生物胞外酶。 四、植物细胞培养产酶的过程 以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶(SOD)为例： SOD具抗辐射、抗氧化、抗衰老等功效。 1、大蒜愈伤组织的培养 2、大蒜细胞悬浮培养 3、酶的分离纯化 第五节 动物细胞培养产酶 动物细胞培养是20世纪60年代发展起来的技术，已经在疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤等人体组织、器官等功能性蛋白质的生产中广泛应用。 动物细胞培养主要用于生产：疫苗、激素、多肽生长因子、单克隆抗体、酶、非抗体免疫调节剂等。 一、动物细胞的特性 1、无细胞壁，适应环境能力较差 2、体积较大，稍小于植物细胞 3、大部分动物细胞在肌体内相互粘连以集群形式存在，具群体效应、锚地依赖性、接触抑制性和功能全能性 4、营养要求比较复杂，必须供给各种氨基酸、维生素、激素和生长因子等 二、动物细胞培养的特点 1、主要用于各种功能蛋白质的生产 2、生长较慢，细胞倍增时间15~100h 3、培养过程中需添加抗生素，以防止微生物污染 4、对剪切力较敏感。须严格控制温度、pH、渗透压、通风搅拌等条件 5、大多具锚地依赖性，宜采用贴壁培养；部分细胞可采用悬浮 6、培养基成分较复杂，一般须添加血清或代用品 7、细胞易退化 三、动物细胞培养方式 动物细胞培养方式分为二大类。 一类是来自血液、淋巴组织的细胞等可采用悬浮培养；另一类是存在于淋巴以外的组织、器官中的细胞 ，须依附在带有适当正电荷的固体或半固体物质的表面生长，要采用贴壁培养。 悬浮培养 贴壁培养 固定化细胞培养 动物细胞培养方式 四、动物细胞培养的工艺条件