附录基因工程室的要求与仪器设备.docVIP

附录二 分子生物学实验室的要求与仪器设备 生命科学的飞速发展孕育了现代分子生物学技术，并且已经渗透到生命科学的各个领域，因此在许多学科如遗传学、分类学、病理学和医学等均开展了相关研究。建立一个标准的分子生物学实验室是非常必要的，它主要包括离心机室、细胞培养室、仪器分析室、普通实验室和放射性核素操作室等；一个分子生物学实验室应具备的仪器设备，按用途不同可分为以下几类： 一、离心机 离心技术是利用物质的沉降、浮力和质量等差异，在离心力的作用下使其分离、纯化和浓缩的一种物理手段。离心技术广泛应用于收集和分离细胞、细胞器和生物大分子等。实验室中常用的离心机容量和转速各不相同，主要有： 1．低速离心机：最大转速6000 r/min（转/分钟），离心力6000 g。主要用于收集细胞、细胞核、细胞膜和细菌细胞等。 2．高速离心机：最大转速25,000 r/min，离心力89,000 g，常有冷却装置。多用于制备、收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸铵沉淀物和免疫沉淀物等。 3．超速离心机：最大转速为120,000 r/min，离心力为694,000 g，常有冷却装置。根据实验体积，选择不同的转头，可满足不同离心力的要求。应用差速离心、密度梯度离心等方法，可以分离制备线粒体、微粒体、染色体、溶酶体、质粒和病毒等各种亚细胞物质；利用强大离心力，长时间离心，可以获得具有生物活性的大分子核酸、酶类及蛋白因子等；利用分析性超离心可以检测生物大分子的构象变化、测定分子量和计算沉淀系数。 4．台式微量离心机：转速可达12,000～18,000 r/min，有常温和冷却两种类型。适用于小量样品（如1.5 mL）的操作，可极大地缩短离心时间。主要用于生物大分子的微量操作。 二、细胞培养 由于细胞培养要求无菌操作，所以在细胞培养室最好设置独立的无菌操作间；如果实验室条件有限，那么在室内走动较少的位置设无菌操作区，同样也能满足要求。 1．超净工作台：是不可缺少的无菌操作装置。其原理是利用鼓风机驱动空气，经过高效过滤器后而通过工作台面，使实验操作区域成为无菌环境。 2．恒温培养箱：可调节温度，用于细胞培养。 3．CO2培养箱：它能恒定地提供一定量的CO2，通常为5%，用来维持培养液的酸碱度。适用于培养各种细胞。 4．恒温摇床：配有控温装置，用于液体细菌的培养。 5．生化培养箱：既可加热，又可制冷，用于细胞培养。 6．倒置显微镜：用来观察了解细胞的生长状况，最好附带照相装置。 7．实体显微镜：用于细胞的观察和照相。 三、分析及检测仪器 1．分光光度计：分光光度法是基于不同分子结构的物质对电磁辐射选择性吸收而建立的分析方法。分光光度计能利用物质在可见光和紫外线区域中的吸收光谱来鉴定物质的性质及其含量。实验室经常使用的大都是紫外与可见光分光光度计，主要用于核酸的定量和纯度检测。 2．电泳仪：可输出稳定的电流（最大250 mA）和电压（高达2500～3000 V，用于测序）。根据输出电压不同，分为常压、中压和高压稳压电泳仪。 电泳技术是检测和鉴定各种生物大分子的纯度、浓度和大小的有力工具，甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的主要工具之一。电泳装置包括电泳仪和电泳槽。 3．电泳槽：一般有水平和垂直电泳槽两种。水平电泳槽可用于纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、薄层电泳和琼脂糖凝胶电泳等。垂直电泳槽可用于聚丙烯酰胺凝胶电泳等。 4．脉冲场凝胶电泳装置：与常规的直流单向电场凝胶电泳不同，脉冲场凝胶电泳采用定时改变电场方向的交变电源，时间与电流交替改变，使DNA分子能不断地调整泳动方向，达到分离目的，目前该仪器可达到的最大分辨率为12 Mb。为保证实验效果，该装置常附加冷却系统。主要用于原核生物染色体的分离、核型分析、大片段物理图谱制作、酵母人工染色体的分析、探测细胞染色体上百万碱基对以上的基因组DNA的缺失等。 5．紫外/可见检测仪：能提供紫外光和可见光源，用于观察凝胶条带。对于核酸，电泳后需要溴化乙锭染色，在紫外光下观察。使用波长为302 nm的紫外灯，灵敏度较高，且对核酸的褪色和断链作用较小。尽量避免长时间的照射凝胶，否则影响回收DNA片段的质量，而且影响观察和照相效果。辐射式紫外灯对观察者照射少，而透射式紫外灯的照相效果好，但须佩带有机防护面罩。 6．核酸/蛋白凝胶图像分析系统：该系统包括图像的摄取、分析、数据处理和打印等功能，可应用于观察和拍摄琼脂糖凝胶、考马斯亮蓝染胶、银染胶、杂交膜、放射自显影片和荧光显影胶片等。利用该系统，可以得到最佳的图像质量并对结果进行定性和定量分析，如自动计算分子量和浓度、斑点自动识别和质量计算、密集条带识别和分析等。 7．凝胶干燥仪：能将电泳后的凝胶进行脱水干燥，便于保存。 8．PCR仪：聚合酶链式反应（polymerase chain re