* 生物选修1(人教版) 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增 DNA片段 要点突破 一、生物体内的DNA复制与PCR反应的比较 ①DNA单链有方向性,DNA母链的3′端对应着子链的5′端,即DNA的两条链是反向平行的。 ②注意不同酶的作用:解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开,而DNA聚合酶与DNA连接酶都是催化形成磷酸二酯键的。 ③DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的3′端上,需要模板,而DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口,不需要模板。 例1 标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步,这三大步需要的温度依次是( ) A.92 ℃、50 ℃、72 ℃ B.72 ℃、50 ℃、92 ℃ C.50 ℃、92 ℃、72 ℃ D.80 ℃、50 ℃、72 ℃ 解析:当温度上升到90 ℃以上(90~96 ℃)时,双链DNA解聚为单链,称之为变性;当温度下降到50 ℃左右(40~60 ℃)时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;当温度上升到72 ℃(70~75 ℃)时,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在Taq DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链,称为延伸。 答案:A ?变式训练 1.
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