遗传药理学例推荐.pptVIP

前 言 华法林的缺点 优点 缺点 治疗窗窄，难以掌握用药的合理剂量，易出现抗凝不足或过量 作用时间长、服用方便、副作用小, 价低 预防和治疗血栓形成和复发 华 法 林 用途 研究背景 遗传药理学 分子生物学 基因个体化给药方案 个体差异 研究背景 VKORC 华法林 无活性的 凝血因子 VitK环氧型 由VKORC1 编码 有活性的 凝血因子 VitK氢醌型 药物代谢酶 CYP2C9*3 研究目的 本研究选取中国汉族人群为研究对象，探讨 CYP2C9*3、VKORC1基因在中国汉族人群的分布情况，同时分析这些基因的多态性（遗传因素）以及患者的基线信息（非遗传因素）与华法林用药剂量之间的关系，以期建立适合中国汉族人群的华法林基因给药模型。 材料与方法 主要试剂 DNA提取试剂盒 DNA纯化试剂盒 引物 dNTP、buffer、Taq酶 限制性内切酶 琼脂糖 Tris、硼酸、EDTA 上海赛百盛基因技术有限公司 TIANGEN 上海英潍捷基贸易有限公司 北京全式金生物技术有限公司 Fermentas GENE TECH Sunshine 主要仪器 F2-Q2型旋涡混合器 台式高速离心机 -20℃冰箱 电子天平 电泳仪 PCR仪 微量移液器 DNA测序仪 江苏泰县医疗器械厂 Eppendorf Germany Hair Sartorious USA Bio-rad Applied Biosystems 2720 Thermo Electron ABI 3130x 病例选择 年龄大于18周岁，需要华法林治疗并要求维持INR在1.8~2.5之间；患者需要长期服用抗凝药华法林至少3个月以上，INR值稳定（连续3次复查INR均达到目标INR范围内）；中国汉族人。 心功能Ⅲ级或以上；妊娠期及哺乳期妇女；近30天内参与其他干预试验者；长期合并应用与华法林有相互作用的药物者，如：三周内服用利福平者；因伴有合并症而不能使用标准剂量者（如：肝、肾功能不全等）。 纳入 排除 实验流程 样本取血（228例） 目标基因片段PCR扩增 （CYP2C9、VKORC1） 纳入及排除目标 病例 收集病人的基线信息 基因组DNA提取 确定病例基因型 伦理委员会，研究注册 由遗传及非遗传因素 建立华法林给药模型 比较不同基因型个体 用药剂量的差异 数据统计 实验内容 ? 采集患者信息 ? 基因分型 基线信息 DNA采集 CYP2C9*3 VKORC1 确定基因类型 PCR扩增 ?基因的多态性与华法林用药剂量之间的关系 实验内容 ? 比较不同种族间CYP2C9*3、VKORC1基因分布频率 ? 分析CYP2C9*3、VKORC1基因多态性与华法林维持剂量间的关系 实验内容 ? 因变量为华法林日剂量（mg/d） ?自变量包括年龄、性别、身高、体重、CYP2C9、VKORC1基因型 ?多元回归统计方法，制定给药模型 统计学分析 实验数据采用SPSS17.0统计软件分析 应用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,基因频率 和等位基因频率采用同组中构成比比较的χ2检验。 患者与Hardy-Weinberg（H-W）平衡的符合程度采用χ2 检验， P＞0.05 样本具有群体代表性。 计量资料数据采用mean ±SD。 不同基因型间华法林剂量比较采用t检验。 P＜0.05，差异有统计学意义。 结果与讨论 表1 CYP2C9*3基因分布频率（n=228，%） CYP2C9*3 AA AC CC C A 基因型频率 219（96.05） 9（3.95） 0（0.00） — — 等位基因频率 — — — 1.98 98.02 实验结果 注：华法林抗凝治疗人群中， CYP2C9*3基因以AA型为主，AC和CC型少见 表2 患者CYP2C9*3基因多态性与H-W平衡的 符合程度检验（n=228） 基因型 观察值 期望值 AA 219