基因组重排技术选育乙醇高产菌株.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（７）：５６６２ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 基因组重排技术选育乙醇高产菌株 １，２，３ ３ ３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ 黄　俊 　黎贞崇 　吴仁智 　陈　英 　陈　东 　黄日波 （１广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室　南宁　５３０００５　２广西大学生命科学与技术学院　南宁　５３０００５） （３广西科学院国家非粮生物质能源研究工程中心　南宁　５３０００７） 摘要　里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）被认为是最合适联合生物加工（ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｅｄｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）的 微生物之一。原始里氏木霉菌株产乙醇能力太低，需要进一步提高其产酒量。我们通过基因组 重排技术提高了里氏木霉菌株产乙醇能力和乙醇耐受力。首先对ＣＩＣＣ４０３６０菌株孢子进行ＮＴＧ 诱变得到正向突变菌株，再以此为出发菌株进行基因组重排。进行基因组重排后，重组菌株在含 不同乙醇浓度的原生质体再生培养基上进行筛选。突变菌株和原始菌株一起做摇瓶发酵实验进 行比较以确定产乙醇能力的提高。经过两轮基因组重排后，筛选获得表现最优异的重组菌Ｓ２ ２５４。该菌株能在利用５０ｇ／ｌ葡萄糖发酵出６．２ｇ／ｌ乙醇，同时能耐受３．５％ （ｖ／ｖ）浓度乙醇。上述 结果表明，本实验采用的基因组重排技术能够有效而且快速获得具有目的性状的优良菌株。 关键词　里氏木霉　基因组重排　联合生物加工 中图分类号　Ｑ９３ 　　纤维素资源是地球上最丰富的可再生资源。可是 研究最多也最透彻的微生物，虽然有很多报道成功的 自然界中的纤维素只有一小部分得到了利用，绝大多 在酿酒酵母里表达纤维素酶，但酶活或者产酶量太低 ［５］ 数纤维素以焚烧的形式处理掉，不仅白白浪费还会造 不能满足ＣＢＰ的要求 。以里氏木霉为代表的产纤维 成环境污染。利用微生物生产的纤维素酶将其转化为 ［４］ 素酶微生物成为ＣＢＰ的首选微生物 。但存在产酒量 人类急需的能源、化工原料，对于人类社会解决环境污 过低，耐酒度低等问题。我们试图通过多种方法来提 ［１２］ 染和能源危机具有重大的实际意义 。现有的木质 高里氏木霉的产酒量。 ［６］ 纤维素资源如蔗渣、秸秆等若能被有效利用以生产乙 　　基因组重排技术是由Ｚｈａｎｇ等 首次提出，即通过 醇，将能够有效降低当今石油消耗所带来的尾气污染， 多亲本之间的ＤＮＡ重组和全基因组片段交换，将优良 而我国每年有近 ６亿吨农作物秸杆得不到有效利 遗传性状重组在一起的过程。自２００２年首次报道以 ［３］ ［７８］ 用 。如何合理利用这些生物质转化成生物质能源成 来，基因组重排技术得到了广泛利用 。本实验中我 为亟待解决的问题。 们对传统的基因组重排技术进行改良，采用电转的方 　　近年来，联合生物加工（ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｅｄｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ， 法进行基因组重排，克服传统基因组重排技术耗时，费 ＣＢＰ）成为研究热点。联合生物加工工艺是把纤维素酶 力等缺点。 生产、纤维素水解、葡萄糖发酵和木糖发酵结合在一个