不同产地枸杞果和叶中总生物碱和总黄酮含量的测定.docVIP

不同产地枸杞果和叶中总生物碱和总黄酮含量的测定 摘要：检测不同地区枸杞果和叶中总生物碱和总黄酮含量，比较各地区含量之间是否存在差异。在对不同地区的枸杞果和叶进行测量时，采用TU-1901型双光束紫外可见分光光度: Chinese wolfberry, different areas, total alkaloid, total flavonoids 枸杞是我国重要的药用植物资源之一，不仅是一种保健品，而且还是一种道地中药材［１］。枸杞主要分布于宁夏、新疆、内蒙古、青海等省区，枸杞主要药用部位为果实，其药用功效的发挥往往与果实内含有的特殊化学成分具有密切的关系。现代医学研究发现，枸杞子具有增强免疫力、防衰 老、抗肿 瘤、抗 氧化 等多方 面的药 理作用［２－６］，其中枸杞总生物碱和总黄酮被公认是果和叶中。近年来，关于枸杞植化、药理、临床、栽培和加工等领域已有深入的研究。传统的判断枸杞品质优劣的主要依据是以外观上是否个大、肉厚、色红、味甜来判断，而这种常规外观判断标准与枸杞果实内在的成分间有无直接的关系，一直是人们普遍关心的问题。为此，我们对不同产地枸杞总生物碱和总黄酮含量测定，比较它们之间存在的差异性。为进一步提高枸杞质量提供理论依据。 1 材料与方法 1.1材料实验材料于200年夏季分别采自新疆、甘肃、青海省都兰、内蒙古、宁夏、。干燥、粉碎并过50目筛备用1.2主要仪器与试剂 TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析), 旋转蒸发仪（Buchi，瑞士）、 电热恒温水浴锅HH.S11-2（北京长安科学仪器厂）、SHZ-D循环水式真空泵（河南郑州长城科工贸有限公司）、DHC-3型酸度计(上海雷磁仪器厂); 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）硫酸阿托品对照品(河南省许昌华仁制药有限公司),溴甲酚绿(分析纯,中国医药公司),其他试剂均为分析纯。 1.3 总生物碱含量的测定1.3.1样品提取 精密称取样品2g蒸馏水用2mol/L的盐酸调pH至3-4抽滤滤液用浓氨水调pH至9-10,用氯仿萃取3次,每次20ml,合并氯仿液蒸干得氯仿萃取物水层再用正丁醇萃取次每次20ml合并正丁醇液,蒸干得正丁醇萃取物氯仿和正丁醇萃取物加无水乙醇溶解并转移至10ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,得样品溶液。 1.3.2溴甲酚绿缓冲液的配制及对照品溶液的配制 精密称取溴甲酚绿125 mg用0.2 mol/L的 NaOH 12.5 ml溶解后加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g加少量蒸馏水溶解转移至250 ml的容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度摇匀备用。 精密称取硫酸阿托品对照品约25 mg置于100 ml的容量瓶中加蒸馏水至刻度摇匀备用。 1.3.3 测定波长的选择 对照品溶液在-800 nm范围内扫谱测定其最大吸收结果对照品溶液与样品溶液显色后在420nm处均有最大吸收所以选择420nm为测定波长。 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液1 ml2 ml，3 ml，4 ml，5 ml分别置于10 ml容量瓶中定容各取1 ml置入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中再精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液振摇1 min静置至氯仿液澄清分取氯仿层以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白在420 nm处测其吸收度以硫酸阿托品量X为横坐标以吸光度Y为纵坐标作标准曲线得回归方程Y=0.00X-0.015，r=0.9965，表明硫酸阿托品在25-125 (μg/ml) 的范围内线性关系良好1.3.5样品含量测定 精密量取样品溶液1 ml置入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中再精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液振摇1 min静置至氯仿液澄清分取氯仿层以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白在420 nm处测其吸度1.3.6精密度考察 精确称取样品粉末约2 g，按照待测样品制备方法制备待测样品溶液，准确吸取待测溶液1.0 ml,按项下的方法，在nm下测定其吸光度，，RSD为0.2%，说明仪器的精密度良好。 1.稳定性研究 在室温下每隔测定供试品溶液0-4 h内RSD=%,2-4 h内RSD=%,说明样品需静置2 h以上测定1.3.8重现性考察将上述溶液平行制备5份待测溶液，测定其吸光度，5次测定的RSD为0.883%，说明方法的重现性好。 1.4.1 样品提取 精密称取材料2 g，用80%乙醇回流提取，固定提取次数为3次，抽滤，合并3次滤液，减压蒸馏，回收乙醇，将提取液用无水乙醇定容于100 ml容量瓶中，摇匀，作为待测原溶液。 各取上述待测原溶液5 ml，精密测定，置25 ml容量瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，稀释至刻度，摇匀，静置。取上清夜5 ml置蒸发皿中，加入2.0 g聚酰胺粉吸附，于50℃水浴中挥去乙醇，然后转入层析柱，先用25