耳针作用的形态学基础―来自HRP神经示踪法的证据-临床医学论文.docVIP

cvbcvbfdtrettttttttttfge的个人个人太热 作者：梅志刚，朱兵，何伟，高昕妍 【摘要】目的观察支配耳甲区迷走神经在延髓水平中枢的投射情况，探讨耳针作用机理。方法健康成年SD大鼠10只，外耳道口方向分离耳甲皮肤与皮下组织，微量注射器缝内注射40μl浓度为30%的HRP神经示踪剂，神经示踪技术观察标记细胞在延脑水平核团分布情况。结果除了在三叉神经脊束核外，在孤束核和迷走神经运动背核以及其他核团也发现了标记神经元或神经纤维。结论耳甲区迷走神经分支与迷走初级中枢有神经联系，耳甲穴位针刺效应很可能是通过耳-迷走反射途径实现的。 【关键词】耳针；孤束核；迷走神经运动背核；辣根过氧化物酶 　　Abstract：ObjectiveToobserveprojectionsofnervusauricularisvagiinbrainstemofoblongatalevel，andtostudythemechanismofauricularacupuncture.MethodsTenSDratswereusedinthisexperiment,askinincisionwasperformedintheregionofauricularconchaofeachrat,fortymicrolitersofa30%solutionofhorseradishperoxidase(HRP)innormalsalineweresubcutaneouslyinjectedintothecutcentralendofauricularbranchofvagusnerve,thendistributionofthelabeledneuronsintheprimarybrainstemwasobservedusingHRPretrogradetracingtechnique.ResultsLabeledneuronsandfiberswereseeninthenucleusofsolitarytract,dorsalnucleusofvagusnerveandothernucleusbesidesnucleusofspinaltractoftrigeminal.ConclusionThereexistsneuralprojectiontoNTSandDMVfromtheterminalofauricularvagusbranch,maybeeffectofauricularacupunctureiscompletedthroughauricular-vagalreflexes. 　　Keywords：Auricularacupuncture;Nucleusofsolitarytract;Dorsalnucleusofvagusnerve;Horseradishperoxidase(HRP) 　　“耳为宗脉之所聚”，耳穴特别是耳甲区穴位刺激作为针灸诊疗学的一个分支的应用受到古今中外临床医生的青睐，其适应证多为高血压病、糖尿病、癫痫、失眠等病［1］。自从1957年法国外科学博士Nogier发现耳穴的坐骨神经点与第4腰椎骨有解剖学联系，并在此基础上提出了著名的“倒置胎儿图”［2］，较多的学者对耳疗作用机制进行了研究。近年来，有关耳针机制的研究报道零星可见，然而截至目前耳疗（特别是耳甲区穴位刺激）的机制尚不明了，缺乏系统的理论阐释［3，4］，耳穴的信息传入中枢机制尚有待探讨。笔者新近电生理实验观察到耳甲区穴位电针能够激活延髓孤束核处葡萄糖敏感神经元（抑制反应型为主）和胰岛素敏感神经元（激活反应型为主）［5］，据此，我们初步认为耳穴作用机制可能与“耳-迷走反射”有关。本研究采用辣根过氧化物酶（HRP）神经示踪法，探讨耳迷走神经分支在延髓水平的投射情况，为“耳-迷走反射”理论假说提供形态学佐证。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物及耳甲区HRP微量注射200～250g的健康成年SD大鼠10只，雌雄不拘，中国医学科学院实验动物中心提供，清洁级，合格证编号：A06-53。动物在12h光照／12h黑暗的条件下单笼喂养一周，并给予自由饮水及进食。 　　经2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/kg)后，在大鼠耳甲部用手术刀片横向划开一条长约2mm缝口，向外耳道口方向分离缝内耳甲皮肤与皮下组织，微量注射器针头向分离后的缝内注射40μlHRP（30%，RZ=3.2，Sigma），注射完毕，退针后，紧按缝口3～5min，每只大鼠两耳各注射3～5个点，注射点尽量分布于整个耳甲艇和耳甲腔。实验过程中严格遵守美国国立卫生院实验动物福利法规定。 　　1.2HRP组化及四甲基联苯胺（TMB）法显色HRP注射后动物存活36～48h，经2%戊巴比妥钠腹腔注射深度麻醉(30mg/kg)后