实验六 外周血单个核细胞的分离.pptVIP

实验六 细胞免疫功能检测 1.外周血单个核细胞的分离 2.E－花环形成实验 3.淋巴细胞转化实验 注意 无菌操作. 注意血制品污染. 控制操作时间，保持细胞存活. 应用水平离心机. E-花环形成实验 利用红细胞的吸附作用，以红细胞为指示细胞，检测外周血中T细胞的数量以及所占比例的一种免疫吸附实验。 结果 E-花环形成率 形成花环的淋巴细胞数 = 淋巴细胞总数(形成和未形成花环的细胞总数) 正常范围:60-80% * 实验原理： 1.密度梯度离心法 粒细胞和红细胞 (1.092g/l) 分离液 (1.077±0.002g/l) 淋巴细胞单核细胞 1.070g/l 血浆层 外周血 淋巴细胞分离液 离心 2.淋巴细胞分离液：聚蔗糖-泛影葡胺 实验方法： 抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液 混匀 取3ml稀释血，yiye沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中 2000rpm，离心20min 小心吸取淋巴细胞层，加入2ml Hank’s液 2000rpm，离心10min 弃上清，加入2ml Hank’s液 2000rpm，离心10min 弃上清，加入2ml Hank’s液细胞计数 血加入到分离液的上层 离心后的单个核细胞层 T T B SRBC CD2 X 100% *