再谈谷氨酸生产菌种的保存方法.docVIP

再谈谷氨酸生产菌种的保存方法 ≥1丫 筮酵科技通讯1999年第28卷第3期 再谈谷氨酸生产菌种的保存方法 …~,err350004/(福州市福州);J.f 摘要g-ig~amp;产茵种的保存直接关系到发酵的产酸率和转化-9-,是味精生产 9 中 - 重 . 要技术措施,是提高发酵产酸率和糖酸转化 率的前提.菌种保存分为供生产用的斜面菌 种保存和长期保存二种.本文只讨论菌种的 长期保存方法.长期保存是将优良菌种处于 休眠状态,要保持其原有的高产特性,提高 其存活力,待生产需要时经活化复壮后提供 使用. 1993年,笔者曾在本刊摘要介绍了几 种谷氨酸生产菌种的保存方法.本文是上 文的补充.文中将继续介绍后来研究和开发 的新的谷氨酸菌种的保存方法,着重介绍在 菌种保存技术上的一些改进措施,从而完善 菌种的保存方法,以便更有救地保存菌种的 活力和高产性能,满足生产需要. 1几种斜面培养基和保存方法保存谷 氨酸菌种的试验对比效果 9o年代初,林瑾琳等对谷氨酸菌种的 保存方法曾进行了初步研究.首先,他们测 试了斜面培养基成分对菌种生长和产酸的影 响.试验配制了三种斜面培养基:(1)基本 培养基(牛肉膏1%,蛋白胨1%NaC1 0.5%,琼脂2.5%,用氨水调pH7.0),(2) 高糖培养基(基本培养基+18%口服葡萄 味精矸f 糖)和(3)高谷氨酸钠培养基(基本培养 基+l8%的99度晶体味精).o.115MPa灭 菌30rain后制成斜面,37T;无菌培养48h, 直至斜面空间无水分方可提供使用.然后, 取斜面接人R菌种,3413培养22h,置 4qc冰箱保存. 保存一年后,经观察与摇瓶产酸测试, 结果如下: ①用18%高糖斜面保存菌种,一年后 斜面上菌苔已溶化消失,经活化一代,斜面 上无菌苔长出,摇瓶发酵不产酸,DH值不 变,OD不长,糖不耗. ②在基本保存培养基+18%味精的斜面 上保存一年后,菌苔尚丰满,经传代一次斜 面培养,菌株生长较好,摇瓶产酸4.87%. ③在对照培养基上(即基本培养基)保 存一年后,斜面干燥收缩,菌苔不很丰满. 经传代培养,斜面上菌株生长情况一般,而 摇瓶发酵产酸情况良好.说明以上三种培养 基,以基本培养基保存菌种产酸最好,高糖 培养基不宜用于菌种保存. 随后,进行了菌种保存方法的试验,斜 面培养基均用基本培养基,设三个处理和一 个对照.即: ? 21? 皮塞 A.斜面菌种T.+液体石蜡封存+橡 B.斜面菌种T,+蒸馏水+橡皮塞 C.斜面菌种T+1%NaC]+橡皮塞 D.对照:斜面菌种+橡皮塞 上述四种方法保存的菌种,各经一年和 二年的保存,传代一次培养后,它们的产酸 分别列于表1. 表l不同保存方法保存一年和二年后的菌苔及发酵产酸情况 保存一年后候存=年后 保存菌苔传代一扶后接种发酵结果保存苗苔传代一扶后接种发酵结果 青法情况pH0DRGlt;%)GA(%】方法情况pH0DRGlt;%)cA(婚】 7107607541701∞O35592 ^丰满^尚可 7008303476750670拈—5348O0.8l0.3.3.62 下沉下沉 7108420507720.8603.3.60 7009103.4.6l C下沉C下沉 71089o0404.73 70092J15236.50.870355.47 丰满D尚可 670881053375I.∞O30446 试验表明,谷氨酸菌种斜面长期保存用 液体石蜡封存加橡皮塞效果最好.保存一, 二年后传代活化一次再进行谷氨酸发酵,产 酸与保存前基本持平.但应选择优质的液体 石蜡,高压灭菌放冷去水后才能使用,封存 深度以lcm左右为宜,使其完全覆盏斜面顶 端.如果液体石蜡量过少,琼脂层稍有露 出,培养物易干燥,菌种会死亡;石蜡层过 厚(超过斜面上端2era以上),保存性也会 下降.该保存法简单易行,不要特殊装置, 也是防止杂菌危害的简便方法. 橡皮塞保存效果也较好,方法更简单, 既可减少水分蒸发,导致培养基逐渐干固, 菌种死亡之弊,又能克服用棉花塞易受潮, 易污染杂菌的缺点. 用蒸馏水及1%NaCI溶液覆盖斜面保存 菌种,活力不太高,不宜使用. 2.磷酸盐缓冲液保存方法的改进 1993年,笔者曾在谷氨酸生产菌苗 种保存方法简介一文中,摘要介绍了李冬 文报导的应用磷酸盐缓冲液保存菌种的 ? 22- 方法(初报).之后,该作者又进行了磷酸 盐缓冲液不同浓度,不同pH值保存菌种的 研究试验,取得满意的效果,进一步完善了 这种保存方法.试验用菌种D.磷酸盐缓 冲液配制用分析纯的KH2PO,(无水)和 Nalf2P04-120,按标准溶液配比精确称 重.配制浓度0.15mol/L,pH7.2.用20x 250ram有玻璃塞的比