蓝白斑筛选的原理及方法.doc

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蓝白斑筛选的原理及方法

蓝白斑筛选的原理及方法 载体pGEMZ在β-半乳糖苷酶(lacZ)的α-肽编码区内具有多克隆区域。在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含lacZ基因的α-肽互补细菌,具有β-半乳糖苷酶的ω片段,所得功能β-半乳糖苷酶(α-肽加ω片段)将底物X-Gal转化为有颜色的产物,得到蓝色菌落。在载体pGEMZ的多克隆区域,克隆上插入片段导致α-肽编码区的破坏,使β-半乳糖苷酶失活,得到白色菌落。α-肽编码区读码框内小的插入片段产生浅兰色菌落,因β-半乳糖苷酶只是部分失活。 重组质粒转化到合适的菌株中(JM109, DH5α),然后涂布到含0.5mMIPTG, 40ug/mlX-Gal指示平板上。可将50ul的X-Gal和100 ulIPTG贮液直接加入到平板中,扩散到整个平板中,在37oC保温30分钟使液体扩散。IPTG溶于水中,贮液浓度为100mM,X- Gal溶于DMF,贮液浓度为50mg/ml。IPTG和X- Gal需分装后保存在-20 oC,可保存2-4个月。 保存条件:粉末在-20℃稳定保存至少三年,具体请参考各个厂家提供的保存条件 注意事项 : ?? ◆培养噬菌体时,Top agar中的添加量为:25 μl/3 ml(24 mg/ml) ?? ◆含有IPTG的培养基4℃避光保存,须在1~2周内使用。 文 - 汉语汉字 编辑词条 文,wen,从玄从爻。天地万物的信息产生出来的现象、纹路、轨迹,描绘出了阴阳二气在事物中的运行轨迹和原理。 故文即为符。上古之时,符文一体。 古者伏羲氏之王天下也,始画八卦,造书契,以代结绳(爻)之政,由是文籍生焉。--《尚书序》 依类象形,故谓之文。其后形声相益,即谓之字。--《说文》序》 仓颉造书,形立谓之文,声具谓之字。--《古今通论》 (1) 象形。甲骨文此字象纹理纵横交错形。文是汉字的一个部首。本义:花纹;纹理。 (2) 同本义 [figure;veins] 文,英语念为:text、article等,从字面意思上就可以理解为文章、文字,与古今中外的各个文学著作中出现的各种文字字形密不可分。古有甲骨文、金文、小篆等,今有宋体、楷体等,都在这一方面突出了文的重要性。古今中外,人们对于文都有自己不同的认知,从大的方面来讲,它可以用于表示一个民族的文化历史,从小的方面来说它可用于用于表示单独的一个文字,可用于表示一段话,也可用于人物的姓氏。 折叠编辑本段基本字义 1.事物错综所造成的纹理或形象:灿若~锦。 2.刺画花纹:~身。 3.记录语言的符号:~字。~盲。以~害辞。 4.用文字记下来以及与之有关的:~凭。~艺。~体。~典。~苑。~献(指有历史价值和参考价值的图书资料)。~采(a.文辞、文艺方面的才华;b.错杂艳丽的色彩)。 5.人类劳动成果的总结:~化。~物。 6.自然界的某些现象:天~。水~。 7.旧时指礼节仪式:虚~。繁~缛节(过多的礼节仪式)。 8.文华辞采,与“质”、“情”相对:~质彬彬。 9.温和:~火。~静。~雅。 10.指非军事的:~职。~治武功(指礼乐教化和军事功绩)。 11.指以古汉语为基础的书面语:552~言。~白间杂。 12.专指社会科学:~科。 13.掩饰:~过饰非。 14.量词,指旧时小铜钱:一~不名。 15.姓。 16. 皇帝谥号,经纬天地曰文;道德博闻曰文;慈惠爱民曰文;愍民惠礼曰文;赐民爵位曰文;勤学好问曰文;博闻多见曰文;忠信接礼曰文;能定典礼曰文;经邦定誉曰文;敏而好学曰文;施而中礼曰文;修德来远曰文;刚柔相济曰文;修治班制曰文;德美才秀曰文;万邦为宪、帝德运广曰文;坚强不暴曰文;徽柔懿恭曰文;圣谟丕显曰文;化成天下曰文;纯穆不已曰文;克嗣徽音曰文;敬直慈惠曰文;与贤同升曰文;绍修圣绪曰文;声教四讫曰文。如汉文帝。 折叠编辑本段字源字形 字源演变与字形比较 折叠编辑本段详细字义 〈名〉 1.右图是 “文”字的甲骨文图片,资料来源:徐无闻主编:《甲金篆隶大字典》,四川辞书出版社。1991年7月第一版。 “文”字的甲骨文字绘画的像一个正面的“大人”,寓意“大象有形”、“象形”;特别放大了胸部,并在胸部画了“心”,含义是“外界客体在心里面的整体影像、整体写真、整体素描、整体速写”。 许慎《说文解字》把“文”解释为“错画也”,意思是“对事物形象进行整体素描,笔画交错,相联相络,不可解构”,这与他说的独体为文、合体为字的话的意思是一致的。“说文解字”这个书名就表示了“文”只能“说”,而“字”则可“解”的意思。“文”是客观事物外在形象的速写,是人类进一步了解事物内在性质的基础,所以它是“字”的父母,

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