hsvⅰ感染l-02细胞对核不均一性核糖核蛋白h2hnrnph2-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６）：１８～２２ ＨＳＶ 感染Ｌ０２细胞对核不均一性核糖核蛋 Ⅰ 白Ｈ２（ｈｎＲＮＰＨ２）表达影响 王赛锋　寸　餠　董承红　洪　敏　刘龙丁　王　蕾　李琦涵 （中国医学科学院／北京协和医学院医学生物学研究所　昆明　６５０１１８） 摘要　单纯疱疹病毒（ＨＳＶ ）对宿主细胞转录及ｍＲＮＡ修饰翻译通路的调控是一个系统的、复 Ⅰ 杂的体系，探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于２ ＤＥ分析，人正常肝细胞 Ｌ０２细胞核不均一性核糖核蛋 白 Ｈ２（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＨ２，ｈｎＲＮＰＨ２）在感染 ＨＳＶ 前后存在表达差异，通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ⅰ ｂｌｏｔ等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。 关键词　ＨＳＶ 　核不均一性核糖核蛋白Ｈ２（ｈｎＲＮＰＨ２）　Ｌ０２Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ Ⅰ 中图分类号　Ｑ７５６ 　　以人体为感染宿主的Ｉ型单纯疱疹病毒 （ＨＳＶＩ） ［１］ １　材料和方法 是一种具有包膜的线状双链 ＤＮＡ病毒 ，其在人群中 较高的感染率及在不同组织细胞中的不同感染形式， １．１　实验材料和仪器 ［２］ 均与其复杂的基因结构和表达功能有直接的关系 。 　　Ｌ０２（人正常肝细胞）购自中科院上海细胞生物研 　　通过比较蛋白质组学研究方法双向电泳（Ｔｗｏ 究所，ＨＳＶ ，大肠杆菌ＤＨ５，ＢＬ２１，ｐＭＤ１８Ｔ载体，原 Ⅰ α ｄｉｍｅｎｓｉｏｎＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２ＤＥ）和生物质谱，发现 核表达载体ｐＧＥＸ５Ｘ１，由本实验室保存；ＩＰＴＧ购自 了一系列在ＨＳＶ 感染前后表达有差异的特异蛋白， Ⅰ 华美生物公司；限制性内切酶ＥｃｏＲ 、ＢａｍＨ 、Ｈｉｎｄ Ⅰ Ⅰ 其中之一即核不均一性核糖核蛋白Ｈ２（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ Ⅲ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶、蛋白分子量标准购自ＴａＫａＲａ公 ｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＨ２，ｈｎＲＮＰＨ２）。ｈｎＲＮＰＨ２属 司；凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒购自Ｑｉａｇｅｎ公 于ｈｎＲＮＰＨ蛋白家族，介导ＲＮＡ聚酶 的前体ｍＲＮＡ Ⅱ 司；总ＲＮＡ提取试剂盒购自天根生物公司，两步法逆转 的选择性剪切，并在ｐｒｅｍＲＮＡ代谢和转运过程中也起 录试剂盒购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司，碱性磷酸酶标记的羊抗鼠 ［３］ 到一定作用 。 ＩｇＧ购自鼎国公司，ＥＣＬ发光底物购自晶美生物公司；昆 　　以往的研究认为，ＨＳＶ 以其编码的某些特定蛋白 Ⅰ 明鼠为本所动物室提供，引物和单链ＤＮＡ探针由三博生 分子，如病毒宿主蛋 白合成关闭蛋 白（ｖｉｒｉｏｎｈｏｓｔ ３２ 物公司合成；［Ｐ］ＡＴＰ购自中国同位素公司，基因测