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[基金项目]国家自然科学基金资助项目 [通讯作者]董立莎，E-mail:dlsha1216@；陈虎彪，E-mail:hbchen@.hk。 [作者简介]张华，TelE-mail: zhanghuaroy@126.com硕士研究生，研究方向：中药内在质量控制与中药新药研发。 断面红棕色及类白色土茯苓药材中总鞣质的含量分析 张华1，董立莎1*，陈虎彪2*，何席呈1，葛向前1，张习贵1，周莹莹1 (1.贵阳中医学院，贵州贵阳 550002；2.香港浸会大学中医药学院，香港九龙) (摘要(本文首次28个不同采集地红棕色白色旨在为该药材质量控制提供一定的实验及理论依据红棕色白色[1]。历版药典均记载土茯苓在药材断面有类白色及红棕色种，长期调查的结果表明，全国药材市场上根据其产地不同，将断面红色或白色分为两类来分别使用，如四川、浙江产者为断面类白，贵州、湖南产者为断面红棕色，使该药材在应用上多样化红棕色白色故本文首次28个不同采集地红棕色白色旨在为该药材质量控制提供一定的实验及理论依据。钨酸钠钼酸钠盐酸磷酸硫酸锂溴所有采集品购买饮片由贵阳中医学院生药教研室董立莎教授鉴定为百合科植物光叶菝葜S glabra的根茎 2 实验方法 2.1 对照品溶液的配制 精密称取没食子酸对照品45.68 mg于100 mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，即得（每1mL中含没食子酸0.045 68mg）。 2.2 供试品溶液的配制 精密平行称取土茯苓药材粉末1.5 g，各3份，分别置250 mL棕色量瓶中，加150 mL 60%乙醇，放置过夜，超声处理20 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体物沉淀），滤过，弃去初滤液50 mL，精密量取续滤液20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 测定用溶液的配制 2.3.1 土茯苓（断面红棕色）总酚测定用溶液的配制 精密量取“供试品溶液的配制”项下制备的溶液10 mL，置25 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取所配溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按“标准曲线的制备”项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL即得。 2.3.2 土茯苓（断面类白色）总酚测定用溶液的配制 精密量取“供试品溶液的配制”项下制备的溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按“标准曲线的制备”项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL即得。 2.3.3 不被吸附的多酚测定溶液的配制 精密量取供试品溶液25 mL加至已盛有0.8 g干酪素的100 mL具塞锥形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，加入磷钼酸试液1 mL，加水10 mL即得。 2.4 测定条件的选择 2.4.1 检测波长的选择” 取没食子酸对照品和总酚比色液，按照“标准曲线的制备”项下方法显色，分别在600~900 nm和400～900 nm之间进行全波长扫描，得出最大吸收波长为760 nm，与2010年版《中国药典》记载一致。 2.4.2 干酪素用量的选择 为了评价干酪素吸附鞣质的效率，对干酪素的用量进行了考察。分别精密量取5份都匀杨梅山样品溶液各25 mL于分别装有0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 g干酪素的100 mL锥形瓶中，分别密塞，置30℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL，即得。结果表明随着干酪素用量的增加游离多酚的含量逐渐减少，当达到0.8 g时，溶液中游离多酚的含量不再减少，说明鞣质已经被干酪素吸附完全，因此确定干酪素用量为0.8 g。 2.4.3 显色时间的选择 根据2010年版《中国药典》方法，经30 min样品中的酚酸可与显色剂反应完全，稳定性考察表明显色后溶液在1 h内稳定。因此选择显色时间为30 min，并于1 h内测定吸光度。 3 方法学考察 3.1 标准曲线的制备 精密量取没食子酸对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 mL分别置25 mL棕色量瓶中，各加入磷钼酸试液1 mL，再分别加水11.5，11，10，9，7 mL用29%碳酸钠溶液稀释置刻度，摇匀，放置30 min以相应的试剂为空白对照，在760 nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，绘制坐标曲线。得回归方程Y=0.008 4X－0.000 3，r=0.999 0。结果表明没食子酸在0.914~7.309 mg·L