刺糖多孢菌高产菌株和野生型菌株多杀菌素生物合成基因簇spn在.PDFVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(11): 1337~1346 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2014.11.003 刺糖多孢菌高产菌株和野生型菌株多杀菌素生物合成基因簇(spn)在 发酵过程中的表达分析 1，2 ，3 1 1 1 2 3 1* 黄颖 赵晨 杨博磊 陈园 关雄 宋渊 张晓琳 1 国家粮食局科学研究院，北京100037；2 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州350002 ；3 中国农业大学生物学 院微生物学系，北京100193 *通讯作者，zxl@ 摘 要 多杀菌素(spinosad)作为一种高效、低毒生物杀虫剂，已在农药、兽药、卫生用药等领域得到应 用。中国关于多杀菌素的研究起步较晚，进展缓慢，目前仍无法实现产业化生产。本研究旨在分析刺糖 多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)高产菌株ASAGF73 与野生型菌株ATCC49460 在发酵过程中多杀菌素 合成基因簇(spinosyn biosynthetic gene cluster, spn) 的表达变化及差异，初步判断影响多杀菌素合成的关 键限速步骤。生物信息学分析表明，spn 基因簇含有9 个转录子，分别在各转录子中设计引物，进行RT- PCR 检测其表达情况。结果显示，突变株ASAGF73 中多杀菌素的产量提高可能与spn基因簇中部分基 因的高表达有关，其中编码聚酮合酶(polyketide synthase, PKS) 的基因和参与大环内联桥形成的基因表达 量远高于野生型菌株的。在ASAGF73 中编码鼠李糖转移酶的spnG 基因在发酵前期过量表达，而在后期 大量合成多杀菌素时表达减弱，有可能成为多杀菌素合成的限速步骤。本研究初步阐明能够提高多杀菌 素产量的分子机制，为构建多杀菌素高产基因工程菌提供参考。 关键词 多杀菌素，刺糖多孢菌，多杀菌素合成基因簇(spn) ，基因表达 Expression Analysis of Spinosad Biosynthetic Gene Cluster(spn) in Hyperproducing and Wild-type Saccharopolysporaspinosa Strains During Fermentation HUANG Ying1,2,3 ZHAO Chen1 YANG Bo- Lei1 CHEN Yuan1 GUAN Xiong2 SONG Yuan3 ZHANG Xiao-Lin1* 1 Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037, China; 2 Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; 3 Department of Microbiology, College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100193, China * Corresponding author, zxl@ Abstract Spinosad is a kind of bio-insecticide showing advantages such as high-efficiency and low-toxicity, which is wildly used in pesticide, veterinary drug, sanitary field, etc. However, industrial produ