生活力优良度测定.ppt

6 . 种子生活力的生化与物理测定7. 优良度测定  6 种子生活力的生化与物理测定6.1 目的　 快速估测种子样品的生活力,特别是休眠种子样品的生活力； 6.2 定义 本章所讲的种子生活力的测定是用染色法测得的种子潜在的发芽能力。 6.3 应用范围　本测定适用于本章附录B表B2给出方法的树种。6.4 原理 1) 四唑测定原理 　应用2,3,5—三苯基氯化(或溴化)四唑(2,3,5—triphenyl tetrazolium chloride or bromide)的无色溶液作为指示剂，以显示活细胞中所发生的还原过程。在活细胞中，2,3,5—三苯基氯化四唑从脱氢酶接受氢,经氢化作用,生成一种红色而稳定的不扩散物质,即三苯基甲月替 (triphenyl formazan)。这样就能识别出种子中红色的有生命部分和不染色的死亡部分。 2) 靛蓝测定原理 　靛蓝(Indigo carmine)为蓝色粉末，分子式为C16 H8 N2 O2 (SO3 )2 Na2 。 靛蓝能透过死细胞组织使其染上颜色。因此，染上颜色的种子是无生活力的。 根据胚染色的部位和比例大小来判断种子有无生活力。 6.5 试剂6.5.1 使用氯化(或溴化)四唑的水溶液,浓度随树种而略有不同,已在表B2中作出规定。如果使用蒸馏水的pH 值不处于6.5—7.5范围之内，可将四唑溶于缓冲溶液。缓冲溶液的配制方法如下：溶液a — 在1000ml水中溶解 9.078g KH2 PO4 ；溶液b — 在1000ml水中溶解 11.876g Na2 HPO4 .2H2 O，或9.472gNa2 HPO4 。　　取溶液 a 2份和溶液 b 3份混合，配成缓冲溶液。 在该缓冲溶液里溶解准确数量的四唑盐，以获得正确的浓度。例如，每100ml缓冲溶液中溶入1克四唑盐即得1%浓度的溶液。最好随配随用。四唑试剂微溶于水，配制时需先溶于少量酒精中，溶解后根据所需浓度配制。剩余的溶液可在短期内贮于低温1-5℃的黑暗条件下。6.5.2 靛蓝用蒸馏水配成浓度为0.05%—0.1%（0.5%）的溶液，如发现溶液有沉淀，可适当加量，最好随配随用,不宜存放过久。 6.6 测定样品 从净度测定后的纯净种子中随机数取100粒种子作为一个重复,共取4个重复。6.7 种子预处理 去除种皮 刺伤种皮 横切 切除部分种子 纵切 取“胚方” 6.7.1 去除种皮 为了软化种皮，便于剥取种仁，要对种子进行预处理。 (1)较易剥掉种皮的种子，可用始温30—45℃的水浸种24—48h，每日换水，如杉木、马尾松、湿地松、火炬松、黄山松、米老排、安息香、黄连木、杜仲等。(2)硬粒的种子如肯氏相思、楹树、南洋楹、银合欢等可用始温80—85℃水浸种，搅拌并在自然冷却中浸种24—72h，每日换水。(3)种皮致密坚硬的种子，如孔雀豆、台湾相思、黑荆树、黑格、白格、漆树和滑桃树等，可用98%的浓硫酸浸种20—180分钟，充分冲洗，再用水浸种24—48h，每日换水。 6.7.2 刺伤种皮　　豆科的许多树种，如刺槐属，种子具有不透性种皮，可在胚根附近刺伤种皮或削去部分种皮，但不要伤胚。6.7.3 切除部分种子——浸种后 a) 横切: 为使四唑溶液均匀浸透，如女贞属，在胚根相反较宽一端将种子切去三分之一。　b) 纵切: 松属和白蜡属等种子可以纵切后染色。在平行于胚的纵轴纵向剖切，不能穿过胚。有些种子可在两边各切一刀，但不要伤胚。　 c) 取“胚方”：大粒种子如板栗、锥栗、核桃、银杏等可取“胚方”染色。取“胚方”是指经过浸种的种子，切取大约1cm3 包括胚根、胚轴和部分子叶(或胚乳)的方块。 6.8 方法6.8.1 四唑染色法6.8.1.1 程序 a. 胚和胚乳均需进行染色鉴定。b. 预处理时发现的空粒、腐烂粒和病虫害粒，属无生活力种子。c. 剥种仁要细心，勿使胚损伤。d. 剥出的种仁先放入盛有清水或垫有湿纱布或湿滤纸的器皿中，待全部剥完后再一起放入四唑溶液中，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。e. 置黑暗处，保持30—35℃，染色时间因树种和条件而异(见附录B表B2)。f. 染色结束后，沥去溶液，用清水冲洗，将种仁摆在铺有滤纸的发芽皿中，以备鉴定。 台钳破种 解剖刀剥种 四唑染色 6.8.1.2　鉴定 a) 原则 根据染色的部位、染色面积的大小和同组织健壮程度有关的染色程度，逐粒判断种子的生活力。通过