薄层析试验报告.doc

薄层析实验报告 篇一：氨基酸的薄层层析实验报告 生物化学实验报告 姓 名： XXX 学 号： XXXXXX 专业年级：临床八年制 __ 组 别： 第二实验室 篇二：氨基酸的薄层层析实验报告 生物化学实验报告 姓 名： XXX 学 号： XXXXXX 专业年级：临床八年制 __ 组 别： 第二实验室 篇三：氨基酸的薄层层析实验报告 生物化学实验报告 姓 名： XXXXX 学 号： XXXXXXXXXXXXXX 专业年级：XXXXXXXXXXXXXXX 组 别： 第X实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 实验日期 XXXX-XX-XX 合作者 评分 XXXX 氨基酸的薄层层析 实验地点 指导老师 第X实验室 XXX 教师签名 批改日期 一、实验目的 1、掌握薄层层析法的实验原理。 2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作方法。 3、掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）的方法。 二、实验原理 1、薄层层析法是色谱分析技术的一种。 是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来） 硅胶吸附薄层层析： 吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。硅胶：表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH），这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附. 硅胶吸附薄层层析的特点： ②硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。 ② 硅醇基显较弱的酸性，因此，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。 ③ 硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高。 2、氨基酸与茚三酮的显(转 载 于:wWw.zAIdian.cOM 在 点 网)色反应： 茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。 3、混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值（rate of flow） 来表示。 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。 即： Rf=原点到层析斑点中心的距离 原点到斑点对应前沿的距离 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因 此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。 三、材料与方法： （一）、材料：分析样品（氨基酸混合液）、吸附剂（硅胶）、粘合剂（0.5%的羧甲基纤维素钠）、氨基酸的异丙醇溶液（丙氨酸、精氨酸、甘氨酸）、展开-显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三酮溶液）； （二）、器材：层析板（5cm×15cm）、尺子、铅笔、小烧杯、玻棒、量筒（10ml）、吹风机、毛细玻璃管、层析缸、药匙、烘箱； （三）、方法： 1、实验流程： 2、操作步骤： （1）薄层板的制备： （2）点样： （3）层析： （4）显色： 四、结果与讨论： （一）结果： 1、实验数据： 1 / 1 1 / 1