藻类生物学试验.ppt

* 实验一 微藻的培养基配制 一、实验目： 掌握微藻的培养基配制方法。 以海水单胞藻培养液通用配方“f/2”为例 二、实验原理 藻类的培养液必须具备藻类的生长繁殖所需要的各种营养元素，并且营养盐的比例应该符合藻类生长繁殖的需要。不同种类的微藻对营养盐的质和量的需求不同，各有其特殊性，因此，制定某种微藻的一个培养液配方时，首先必须进行一系列的试验，了解这该种藻类对营养的要求，并在使用中验证配方的效果，加以改进，使配方达到更理想的水平。藻类对营养盐的需求也有很多共同点，因而一些培养液配方（如F/2）可应用于多种藻类的培养。 进行微藻培养时，可根据培养藻类对营养的要求，选用合适的配方，在消毒水中按配方加入各种营养物质配成。所加肥料应保持清洁，某些不清洁肥料必须消毒，预防敌害生物通过肥料污染。 绿藻培养液配方： ①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）： NaNO3 0.1g 2Na3C6H5O7﹒ 11H2O 0.02g K2HPO4 0.01g Fe(SO4)3(1%溶液) 10滴 海水 1000ml ②亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）： NaNO3 0.05g 维生素B12 200mμg KH2PO4(1%溶液) 0.005g 人尿 2ml FeC6H5O7 0.2ml 维生素B1 200μg 海水 1000ml 培养亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。 硅藻培养液配方： ①艾伦-内尔森（Allen-Nelson）培养液{Allen，E.J.et al （1910）}： A. KNO3 20.2g 纯水 100ml B. Na2HPO4.12H2O 4.0g CaCl.6H2O 4.0g HCl（浓） 2.0ml 纯水 80ml FeCl3（溶液） 2.0ml B液的配制法：先把氧化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二钙4g溶解于40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓慢滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两溶液混合。 使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消毒后静置24h，然后将上层清夜倒出使用。 培养液是根据培养液配方配制的。为了减少每次称量的麻烦，固体的营养元素一般都配成母液（如浓缩1000倍的母液），在使用时，只要吸取一定的量加入培养液中即成。主要营养元素可以单项营养元素配成母液，也可以分成若干组，每组2种或多种营养元素同配在一起。微量元素和辅助生长有机物质也多种组合在一起，配成母液。在浓营养溶液中一般生物因不能忍受而死亡。 三、实验材料及用具 1、器材 电炉；灭菌锅；pH计 500ml 试剂瓶（每组5个）； 玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）/牛皮纸、细绵绳 2、试剂： 蒸馏水、海水 各种试剂 NaNO3; NaH2PO4；FeCl3 EDTA；Na2SiO3.9H2O；盐酸硫铵素(VB1) ；Biotin VH 三、实验步骤 （一） F/2 (+ Si)培养基母液的配制（用去离子水配制） 1.A液 500 ml 1000倍 NaNO3 37.5 g; NaH2PO4 2.5 g 2.B液 500 ml 1000倍 Fe-EDTA 2.5 g (FeCl3 1.6 g + EDTA 0.9 g) 3.C液 500 ml 1000倍 Na2SiO3.9H2O 10 g 4.D液 500 ml 1000倍 盐酸硫铵素(VB1) 5 mg (试剂 50 mg/ml取100 μl) Biotin VH 0.025 mg (试剂 0.1 mg/ml取250 μl) VB12 0.025 mg (试剂 0.25 mg/ml取100 μl) 先用维生素分别用纯水溶解