四肠道菌的分离与鉴定.PDF

实验四实验四实验四实验四肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定 （（（（IIIIIIII））））  细菌形态观察与肥达实验细菌形态观察与肥达实验  肠道菌分离与鉴定系列实验（肠道菌分离与鉴定系列实验（22）：）： ––细菌形态观察细菌形态观察细菌形态观察细菌形态观察 （（（（菌落菌落菌落菌落、、革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色革兰氏染色）））） ––分离纯化疑似菌落、肉汤增菌培养，为下次生分离纯化疑似菌落、肉汤增菌培养，为下次生 化和药敏实验作准备化和药敏实验作准备化和药敏实验作准备化和药敏实验作准备。。  肥达试验结果观察：肥达试验结果观察： ––4444人人人人////组组组组，，每人稀释每人稀释每人稀释每人稀释一一排试排试排试排试 管管管管 （（（）））支支支支，， 分别加分别加HH、、OO、、HH 、、HH 其中的一种抗原，其中的一种抗原， AA BB 看结果看结果看结果看结果。。 粪便标本采取、保存 （甘油保存液）、送检 （（一））分离培养分离培养 （（分区划线接种分区划线接种）） 革兰染色 （二）分离培养（分区划线 氧化酶试验 接种） 肉汤接种肉汤接种 （（增菌增菌）） （三）接种生化反应条，药敏试验 （（四））结果观察察 Pink lawn 菌落形态特征观察 大小、颜色、气味、湿润或干燥、表面光滑 或粗糙、边缘齐整、溶血性、色素分泌与否 等等 光滑型光滑型 粗糙型 粘液型 革兰染色操作步骤： 水 G+ 洗洗 水水 水洗 洗 涂片涂片 结晶紫结晶紫 碘液碘液 G- 固定 初染10 s 媒染10 s 脱色剂 番红/沙黄 1010-20s20s 复染10s 注意事项注意事项： 1. 在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时， 都不易均匀，固定时，不可过热，以载 玻片不烫手为宜。 2. 严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关 键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误 为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴 性菌会误为革兰氏阳性菌。 3. 在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染 色反应为准，最后油镜观察。 肉汤接种过程肉汤接种过程 肥达试验肥达试验肥达试验肥达试验 【【原理原理】】肥达试验肥达试验 （（Widal testWidal test））是用已知是用已知 的伤寒杆菌的伤寒杆菌O、H抗原和甲抗原和甲、乙型副伤寒型副伤寒 杆菌H抗原与病人血清做定量凝集试验， 以测定患者血清中有无相应抗体，根据抗 体含量的多少以及增长情况，可帮助诊断 伤寒及副伤寒伤寒及副伤寒。 肥达试验操作方法肥达试验操作方法肥达试验操作方法肥达试验操作方法 0.5 ml 1×5 稀释 0.5 1:160 凝集结果判断凝集结