实验三十一 种子生活力的快速测定.docVIP

实验七 种子生活力的快速测定 氯化三苯基四氮唑法（TTC法） [原理] 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚无此反应。当TTC溶液深入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH3或NADPH2）还原时，可产生红色的三苯基甲曁（TTF），胚便染成红色。当种胚的生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化则不明显，故可由染色的程度推知种子生活力的强弱。 [仪器与试剂] 培养皿2套，镊子1靶；单面刀片1片；垫板（切种子用）1块；烧杯1个；综合试剂瓶；取1gTTC溶于1dm3蒸馏水或冷开水中，配成0.1%的TTC溶液。药液pH应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后在加水）。 [方法] 1．将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2．随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3．把切好的种子分别放在培养皿内，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4．放入30～50℃的恒温箱内保温30min。也可在20℃左右的温室下放置40～60min。 5．保温后，倾出药液，用自来水冲洗种子2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，办判断结果记入表内。 染色法测定种子生活力记载表 项目 方法 种子名称 供试粒数 有生活力的种子粒数 无生活力的种子粒数 又生活力的种子站供试粒数的% [注意事项] 1．TTC溶液最好现配现用。如需要贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2．染色温度一般为25～35℃为宜。 3．判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4．判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失技能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚叶轴的连接处或在培根上有较重的坏死部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。 5．对于不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所要去的条件列举如下： TTC法测定主要作物种子生活力要点 作 物 种子准备 TTC浓度(%) 在35℃下染色时间（h） 水 稻 高梁、玉米及麦类作物 棉花、荞麦、蓖麻 花生、甜菜、大麻、向日葵 大豆、菜豆、亚麻、三叶草 去壳纵切 纵 切 剥去种皮 剥去种皮 无须准备 1 1 1 1 0．1 2～3 0.5～1 2～3 3～4 3～4 红墨水（酸性大红G）染色法 有生活力的种子其细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，某些染料如红墨水中的酸性大红G不能进入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料可进入细胞内使胚部染色。所以可根据中子胚部是否染色来判断种子的生活力。 [仪器与试剂] 用具与TTC法相同。 红墨水溶液的配制 取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。 [方法] 1．先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分新种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。 2．取浸好的新种子，陈种子和死种子50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。 3．将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。 4．染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出来为止。 5．对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。凡胚部部着色或略带浅红色者，即为具有生活力的种子，若胚不染成胚乳相同的红色，则为死种子。把测定结果记入表内（同TTC法）。 [思 考 题] TTC法和红墨水测定种子生活力有何不同？ 参考文献 [1] 中国科学眼北京植物研究所植物园种子站. 北京市种子站编. 小麦种子生活力的测定——红四氮唑染色法简介. 北京人民出版社 .1978年 [2] D·F格雷勃编. 农业种子红四氮唑测定手册. 农业出版社 .1979年 [3] 山东农学院、西北农学院编. 植物生理学实验指导. 山东科学技术出版社 .1980年 3