二研-2011年一季度 VII因子.pptVIP

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2018-05-03 发布于浙江
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二研-2011年一季度 VII因子.ppt

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S S 第一季度研究内容及进度指标研究内容：尝试三角摇瓶培养及500ml-1L搅拌瓶连续培养，摸索调整培养条件，观察细胞生长状态的变化，确定细胞接种量，细胞最高培养密度，研究在连续培养过程中，细胞数的变化，表达产物活性浓度的变化等其他指标的变化。进度指标确定细胞接种量，细胞最高培养密度，研究连续培养过程中细胞的生长状态，探索优化培养。三角摇瓶培养观察结果培养条件：37℃, 90r.p.m 培养观察结果在培养初期，细胞生长正常，但由于无CO2来调节PH，培养一周后，细胞随着PH升高（克隆F5除外），细胞状况变差，细胞数下降，细胞死亡。克隆F5在无CO2的培养条件下，仍能很好的生长。细胞最佳接种量： 1.5*105cells/ml 搅拌瓶观察培养1 尝试500ml搅拌瓶培养连续培养细胞培养条件：37℃, 5% CO2, 50RPM 培养基：IS CHO CD (4ml GlutaMAX/100ml medium) 细胞接种量：1.5*105cells/ml Culture in 500ml spinner flask in 37℃, 5%CO2, 50r.p.m. 　 Cell density (*105cells/ml) Culture volume(ml) cell proliferation Production (ng/ml) Activity (IU/ml) Total of Activity(IU) 　 PH Day0 1.5 125 　　　　 IS CHO-CD medium 　 Day1 1.964 125 ↑1.3 times 58 0.0936 11.7 Add 10ml CHO-CD medium and 2.5ml IS Feed-CD XP every day 　 Day3 / 148 　 265 0.0148 2.18 　 Day4 5.642 160 ↑5 times 135 0.0773 12.41 　 Day5 6.32 170 ↑6 times 268 0.0061 1.05 Change medium PH≈7.0 Day9 24.53 200 ↑26 times 97 0.2223 44.45 Change medium 　 Day11 　 200 　 48.6 0.0573 11.46 Add 100ml medium and 6ml IS Feed 　 Day13 21.5 300 ↑35 times 48 0.0165 5.06 Add 3ml IS Feed PH≈7.0 Day14 5.6 300 ↓9 times 60 0.0112 3.47 Change medium (360ml) 　 Day15 4.5 360 →8.6 times 16 0.0061 2.19 Add 8ml IS Feed every day 　 Day16 4.85 370 →9.5 times 11 0.063 23.15 　 Day18 10.45 384 ↑21 times 13 0.069 26.54 　 Day19 10.54 392 →22 times 18 0.079 30.8 Change medium (400ml) 　 Day20 8.66 400 →18.5 times 7.6 0.056 22.2 Add 10ml IS Feed-CD XP every day pH↑ 7.0, 8.0 Day21 6.04 410 ↓13.2 times 12 0.065 26.6 　结果细胞最高密度应控制在 2.5*106cells/ml左右, 当细胞密度超过此数值时，细胞生长将受影响，细胞出现空泡，变大，增殖缓慢，产物表达量下降。搅拌瓶观察培养2 1L搅拌瓶克隆 A4, F5， H1， H2 接种量 1.5*105cells/ml 培养条件：37℃, 5% CO2, 50RPM 培养基：IS CHO CD-XP (4ml GlutaMAX/100ml medium) 细胞最高密度控制在2.5*106cells/ml, 　 day 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Activity A4 0.221 0.868 0.805 　 0.837 　　 0.720 0.575 0.469 0.685 0.680 　　 0.472 0.694 0.734 0.746 0.777 　 20min F5 0.22