色谱柱活化和保养6.pdf

色谱柱活化和保养 Thermo Fisher Scientific 金琦芸 1 Thermo CCS 部门介绍 • ThermoHypersil-Keystone的前身是成立于1976年,并且是世界知名的液相 色谱柱和液相色谱填料的专业公司Hypersil公司,所生产的创新型分离材料 在国际市场得到了广泛的应用。 • 随着时间的推移，Hypersil成为了Thermo Electron公司的一部分,并在2000 年顺利地收购了Keystone 公司现在正式的成为了ThermoHypersil- Keysone公司。产品包括液相色谱柱，气相色谱柱，样品瓶和固相萃取小 柱等等。 2 内容 • 新色谱柱活化 • 色谱柱日常使用保养 • 色谱柱日常保存 • 色谱柱清洗和再生 3 新色谱柱活化 • 使用新的C18色谱柱时,用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，然后用甲醇/ 乙腈：水（50：50 ）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡10-30柱体 积 • 使用新的正相色谱柱时，用流动相平衡20-30个柱体积。 • Thermo 部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流动相中，用于反相 色谱时，请先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积 • 当用HILIC 模式时，新柱用50倍柱体积50/50 乙腈/水活化和平衡，然后 再用流动相平衡20个柱体积 • 离子色谱柱（SAX,SCX):新柱先用100%甲醇/或乙腈冲洗20个柱体积， 然后转换到流动相平衡 4 新柱测柱效 • 建议新色谱柱按COA 报告测试柱效 例如：C18 测试柱效方法： 测试液的配制方法：邻-二甲苯（600ul ）溶于100 ml 流动相中. 萘50 mg，溶于100 ml流动相 流动相：60/40 乙腈/水 流速：1.25 mL/min 检测波长：254 nm 进样体积：3.0 uL 5 色谱柱日常使用保养 •使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度） 避免问题的“秘诀” •大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 - 8.0 •避免流动相组成及极性的剧烈变化 •使用HPLC级试剂，流动相使用前必须经脱气和过滤处理 •如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净， 并保存在乙腈中 •压力升高是需要更换预柱的信号 •确认流动相中缓冲盐的溶解性 •确认样品在流动相中的溶解性 •避免压力的突变 6 溶剂 使用不脱气或脱气不完全的流动相会导致形成气泡、泵性能不稳定、检测器噪 音高以及其它检测器故障 流动相脱气 120 100 80 60 Heating Helium 40 Vacuum 20 Ultrasonic 0 7 溶剂 溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”，特别是梯度方法 溶剂纯度的影响 8 溶剂 溶剂混合产生的问题 流动相中所使用的不同溶剂必须互溶 流动相中溶剂不互溶会导致: 1. 基线漂移， 2. 保留时间的重现性差， 3. 出现肩峰和“鬼峰”的问题.