大鼠坐骨神经挤压损伤对脊髓回返性抑制影响的研究-神经病学专业论文.pdf.docxVIP

实验材料1.1实验动物及来源清洁级健康SD雄性大鼠56只，体重180-400 g。所有大鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司，饲养环境保持恒温(20士2℃)、恒湿(50一60%)、安静、12小时明暗交替人工光照。饮用水和标准饲料均供动物自由取用，笼具垫料每周更换2次。1.2主要试剂10%水合氯醛国药集团化学试剂有限公司液体石蜡国药集团化学试剂有限公司磷酸氢二钠国药集团化学试剂有限公司磷酸二氢钠国药集团化学试剂有限公司多聚甲醛美国Sigma公司氢氧化钠国药集团化学试剂有限公司双氧水国药集团化学试剂有限公司氯化钴国药集团化学试剂有限公司硫酸镍铵国药集团化学试剂有限公司二甲胂酸钠国药集团化学试剂有限公司盐酸国药集团化学试剂有限公司Hanker-Yates 组合药剂美国Sigma公司铬明矾国药集团化学试剂有限公司棓花青国药集团化学试剂有限公司琥珀酸钠国药集团化学试剂有限公司氮蓝四唑国药集团化学试剂有限公司吩嗪N-甲硫酸盐国药集团化学试剂有限公司异戊烷国药集团化学试剂有限公司液氮上海嘉日宝化工有限公司地西泮国药集团化学试剂有限公司1.3实验器材显微解剖镜日本Olympus 公司37度恒温箱北京医疗设备厂试验用控温电热毯北京医疗设备厂显微器械包上海市医疗器械批发部骨钳、拔牙钳上海市医疗器械批发部立体定位仪日本NaRIshige公司电生理设备英国Digitimer 公司微量注射器上海市医疗器械批发部双通道输液器上海百特医疗用品有限公司冰冻切片机日本莱卡公司电子天平上海精科公司超纯水系统德国HERAUS 公司精密PH仪美国ORIon 公司超低温冰箱日本Sanyo 公司磁力搅拌器上海精科公司实验方法1.1动物模型制备1.1.1实验动物及分组依据神经损伤后6周神经再支配才能彻底完成[9]以及电生理实验分别检测MG对LG-S的RI和LG-S对MG的RI，做如下分组。RI/MSRsGroupof ratsNumber of ratsMG toLG-SASC55ASC69ASC145control9LG-S toMGASC55ASC69ASC145control9Total56进行电生理实验的动物分别取自正常对照组18只（其中8周龄9只和20周龄大鼠9只），ASC5组中13周龄大鼠，ASC6组中14周龄大鼠和ASC14组中22周龄大鼠。1.1.2神经挤压实验动物用10%水合氯醛/地西泮（10%水合氯醛每100克体重腹腔注射0.4ml，地西泮针剂每100克体重腹腔注射0.1ml）麻醉后，显微解剖镜下手术暴露其左侧后肢大腿中部的坐骨神经，用钟表钳钳夹腘窝处的坐骨神经5秒，挤压宽度3mm[9, 27]。保留神经外膜。挤压后缝皮、麻醉苏醒后放回原鼠笼。1.1.3模型建立和实验过程各组实验大鼠神经挤压再生后，被麻醉并置于恒温电热毯上。显微解剖镜下分别打开双后肢的腹侧面，暴露并切断右侧坐骨神经，分离左侧后肢的肌肉和坐骨神经及其分支至LG-S 神经和MG 神经。所有分离的神经都远端离断以用来记录或给予刺激。手术暴露背侧L4－L6脊神经背根，切断后近端用以刺激激发MSRs（Test Stimuli）。术后，将大鼠放置在立体定位仪上，头部固定。将暴露的椎骨以及腿部周围组织和皮肤用线固定在定位仪两侧，使之围成立方池；在立方池中加入预热至37oC 的液体石蜡。3对银丝双极电极被用来刺激或记录。测试刺激(Test Stimuli)电极（E1）：置于在脊髓石蜡立方池中，L5背根游离断端固定在此电极上以便通过电刺激激发MSRs；MSRs 记录(Record)电极（E2）：置于后肢石蜡立方池中，MG 或LG-S 神经近端残支被固定在此电极上以记录MSRs；逆向刺激（Condition Stimuli）电极（E3）：置于后肢石蜡立方池中，LG-S或MG神经近端残支被固定在此电极上以刺激产生逆向冲动。上海交通大学硕士学位论文图2显示大鼠左侧坐骨神经各分支。所有神经分支都分离并末端离断。示意图中各神经分支与照片中一一对应。1.4.2电生理数据采集与分析刺激脊髓背根（L5）可以在坐骨神经的两个分支(LG-S和MG 神经)上记录到脊髓单突触反射（MSRs）。DigitimerD4030（Digitimer,UK）用于刺激触发刺激隔离器以刺激神经，刺激频率1次/秒，刺激强度（2-5V）以诱导出MSRs。记录的MSRs 经NeuroLog System放大1000倍（x1k）并滤波（Digitimer,UK）后经CED1401Power（CambRIdge Electronics, UK）转换输入计算机由Spike2 采集处理（图3）。条件刺激在测试刺激前的0-50 ms之间,两者时间间隔分别为0,2,3,4,5,8,15,30,40和50ms。两者刺激强度一般设置为5倍阈值强度。将不同的条件刺