大鼠脊髓tdag8及其下游信号通路在骨癌痛中的作用-外科学(麻醉学)专业论文.pdf.docx

复合物的转染效率，用MTT 法检测转染复合物的细胞毒性，用real-time PCR 及Westernblot测定siRNA-pool的干扰效率。结果采用jetPEI?作为转染介质转染效率高，达92.9%。转染复合物的细胞毒性低，各组细胞成活率差异无统计学意义。siRNA50、100、200pmol可剂量依赖性地抑制TDAG8的表达，siRNA200pmol组可抑制TDAG8mRNA表达达88%，抑制蛋白的表达达73%。结论化学合成的siRNA能高效地抑制RNdsc上TDAG8的表达。关键词siRNA；RNdsc；TDAG8；表达；细胞毒性第四部分：鞘内注射siRNA对大鼠骨癌痛的影响目的观察不同时间点鞘内注射TDAG8-siRNA对大鼠骨癌痛的影响。方法实验分为预处理组和处理组，每组又分为5个亚组：sham、BCP+NS、BCP+mismatch、BCP+vehicle及BCP+siRNA组。预处理组和处理组分别在种瘤后3d及6d开始鞘内给药，1次/d，连续3d。BCP+NS、BCP+mismatch、BCP+vehicle 及BCP+siRNA组分别鞘内注射NS、mismatch、vehicle及siRNA，各组鞘内给药的容积均为10μl，siRNA的剂量为3μg/次。sham组鞘内给药同BCP+NS组。观察各组给药前后的痛行为学变化（n=8）。Real-timePCR及Westernblot测定鞘内给药24 h后,脊髓背角TDAG8的表达变化及用Westernblot测定其下游PKA、CREB、PKC 和ERK1/2蛋白的表达变化（n=4）。结果在预处理组鞘内注射TDAG8-siRNA可抑制骨癌痛的发生,在处理组鞘内注射TDAG8-siRNA可缓解骨癌痛，但不能完全逆转之。在预处理组和处理组中，鞘内注射TDAG8-siRNA可显著抑制脊髓背角TDAG8mRNA和蛋白的表达，可显著抑制其下游PKA、CREB、PKC和ERK1/2蛋白的表达。结论鞘内注射TDAG8-siRNA可明显缓解BCP大鼠的骨癌痛，同时抑制脊髓背角TDAG8及其下游蛋白的表达。关键词鞘内注射；TDAG8-siRNA；骨癌痛中文摘要大鼠脊髓TDAG8及其下游信号通路在骨癌痛中的作用第五部分:TDAG8-PKA-CREB 信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用目的研究TDAG8-PKA-CREB信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用。方法实验分为鞘内注射H-89和鞘内注射TDAG8-siRNA两大实验组。鞘内注射H-89实验组：种瘤后9d的BCP大鼠，随机分为生理盐水（NS）组、二甲亚砜（DMSO）组及H-89组（n=8）。NS组及DMSO组分别鞘内注射NS及DMSO，H-89组鞘内注射H-89（8nmol），各组鞘内注射的容积均为10μl。观察各组鞘内给药前及鞘内给药后15、30、45min的AS及PWT 变化。Westernblot测定各组鞘内给药1h后脊髓背角PKAca及p-CREB的表达水平。鞘内注射TDAG8-siRNA实验组：实验分组与方法同第二、第四部分。结果骨癌痛大鼠脊髓背角中PKAca及p-CREB蛋白的表达水平明显增加。鞘内注射TDAG8-siRNA在减轻BCP大鼠痛行为学的同时可降低脊髓背角PKAca及p-CREB的表达。鞘内注射H-89显著减轻BCP大鼠痛行为学且可明显抑制脊髓背角PKAca及p-CREB的表达。结论TDAG8-PKA-CREB信号转导通路可能参与了大鼠骨癌痛的过程。关键词TDAG8；PKA；CREB；骨癌痛第六部分:TDAG8-PKC-ERK 信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用目的研究TDAG8-PKC-ERK信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用。方法实验分为鞘内注射GF109203X和鞘内注射TDAG8-siRNA两大实验组。鞘内注射GF109203X实验组：种瘤后9d的BCP大鼠，随机分为生理盐水（NS）组、二甲亚砜（DMSO）组及GF109203X 组（n=8）。NS 组及DMSO 组分别鞘内注射NS 及DMSO，GF109203X 组鞘内注射GF109203X（0.4nmol），各组鞘内注射的容积均为10μl。观察各组鞘内给药前及鞘内给药后60、120、180min的AS及PWT 变化。Westernblot测定各组鞘内给药3h后脊髓背角p-PKCγ及p-ERK1/2的表达水平。鞘内注射TDAG8-siRNA实验组：实验分组与方法同第二、第四部分。结果骨癌痛大鼠脊髓背角中p-PKCγ及p-ERK1/2蛋白的表达水平明显增加。鞘内注射TDAG8-siRNA在减轻BCP大鼠痛行为学的同时可降低脊髓背角p-PKCγ 及p-ERK1/2的表达。鞘内注射GF109203X显著减轻BCP大鼠痛行为学且可明显抑制脊髓背