环指蛋白ring1与a型核纤层蛋白的细胞内相互作用.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 201 1, 38(1): 55~59 指蛋白 与 型核纤层 RING1 A 蛋白的细胞内相互作用* 1, 2)** 1)** 2, 3) 1, 2) 1) 1, 2) 1, 2)*** 陈维春 宋 杰 刘振杰 蒋智文 袁 源 郑慧玲 刘新光 1) 2) ( 东医学院衰老研究所，东莞523808 ； 广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江524023 ； 3) 广东省中医院检验科，广州510120) 摘要 环指蛋白RING1 能结合DNA 并抑制基因的转录 采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选出了与A 型核纤层蛋 白(lamin A)结合的RING1 蛋白，回复杂交酵母能在缺陷培养基上生长 RING1 与绿色荧光蛋白融合载体转染HEK293 细胞， 激光共聚焦显微观察发现RING1 能与带 色荧光蛋白的lamin A 蛋白在细胞核周围共定位 免疫共沉淀结果证明RING1 与 lamin A 能够相互作用 结果证明了一个新的lamin A 结合蛋白，为揭示lamin A 影响基因表达乃至细胞衰老提供了依据 关键词 RING1 ，核纤层蛋白A，相互作用，酵母双杂交 学科分类号 Q51，Q28 ，Q78 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2010.00311 A 型核纤层蛋白(lamin A) 的基因突变或异常加 389 ～658 氨基酸残基的酵母表达质粒pGBKT7- 工能引起早老症[1-2] 这类早老症患者细胞往往出 LA-C 和 色荧光蛋白与lamin A 融合表达的载体 现核形态严重异常，细胞应激机械张力发生改变使 pDsRed-LA 由 东医学院衰老研究所构建 含有 得染色质和核膜出现损伤， 后产生适应性和保护 全长RING1 基因的质粒pCDNA3.1-RING1 由第四 [3] 性基因的转录激活 RING1 蛋白具有典型的 军医大学医学遗传学与发育生物学教研室惠赠 大 RING 结构域，经由 C 端富含甘氨酸的区域与 肠杆菌DH5 、质粒载体pEGFP-N1 和pCMV-HA CBX4 结合，与BMI1、EDR1 等蛋白结合共同构 由广东医学院衰老研究所保存 酵母AH 109 购自 成PcG 家族(polycomb group) 复合体 RING1 功能 Clontech 公司 HEK293 细胞由香港大学周中军博 是转录抑制因子，过表达RING1 抑制En-2，同时 士惠赠 限制性内切酶 R 、 d 、 、 Eco 玉 Hin 芋 Pst RING1 过表达会导致原癌基因 c-jun 和 c-fos 的 T4 DNA 连接酶均购自TaKaRa 公司 HA 和lamin A 表达[4] 抗体分别购自Clontech 和 SANTA CRUZ 公司 本课题组采用酵母双杂交方法从人骨骼肌 Lipofectamin2000为Invitrogen 公司产品 酸洗玻璃 DNA 文库中筛选lamin A 相互作用蛋白，发现环 珠为Sigma 公司产品其他为国产分析纯试剂 指蛋白RING1 可能