第十章动物实验技术.pptVIP

动物实验技术录像—— 第十节 现代实验动物学技术 一、试管动物培育技术 试管动物（test tube animal）是指经体外受精获得早期胚胎并移植到假孕动物子宫发育而产生的动物。试管动物培育除本身的发育生物学研究意义外，还具有克服动物生殖缺陷、提高动物繁殖力、定向培育动物新品种（系）等重要意义。试管动物培育技术涉及到超数排卵、体外受精、胚胎培养与移植等技术。 试管动物培育程序: 试管动物培育程序如图. 精子采集 超数排卵 假孕动物准备 精子获能 卵子采集 体外受精 胚胎移植 胚胎培养 产仔 二、转基因动物培育技术 培育转基因动物的关键技术包括：外源目的基因的制备、外源目的基因的有效导入、胚胎培养与移植、外源目的基因表达的检测等。 （1）目的基因的制备与纯化：目的基因可以来源于，①通过限制性内切酶预先分离的某一基因；②逆转录法得到的cDNA；③人工合成的DNA片段；④聚合酶链式反应（PCR）扩增的特定基因片段。 （2）卵供体母鼠和假孕鼠的准备。? （3）超排卵与取卵，同时取精子。 （4）基因显微注射。 （5）受精卵移植。 （6）目的基因的表达整合鉴定和检测。 （7）建系。 显微注射法制备转基因小鼠的程序 另外,现在还有用逆转录病毒,腺病毒,禽痘病毒作为载体感染动物复制转基因动物模型. 三、克隆动物培育技术 1.核移植法克隆动物:细胞核移植又包括胚胎细胞核移植、体细胞核移植、干细胞核移植等。 2. 胚胎分割法克隆动物:将尚未着床的早期胚胎经显微手术后，分割为二、四、六若干等份，给每个受体内植入一部分胚而妊娠产仔，这样由一个胚胎可以克隆出多个遗传性能完全一样的后代个体。 犬灌胃方法 猪灌胃方法 3. 其他途径给药方法 （1）呼吸道给药：呈粉尘、气体及蒸汽或雾等状态的药物或毒气，均需要通过动物呼吸道给药。如实验时给动物做乙醚吸入麻醉、用锯末烟雾制作慢性气管炎动物模型等，特别在毒理学实验中应用较广泛。 （2）皮肤给药：为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用经皮肤给药方法。如兔和豚鼠常采用背部一定面积的皮肤脱毛后，将一定的药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。 人与动物的用药量换算方法 观察一种药物对实验动物的作用时，一个重要的问题就是给动物用多大的剂量较合适。剂量太小，作用不明显，剂量太大，又可能引起动物中毒致死。 1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒剂量或致死剂量,然后用小于中毒量的剂量，或取致死量的若干分之一作为应用剂量，一般可取1/10～1/5。 2. 确定剂量后，如第一次用药的作用不明显，动物也没有中毒的表现,可以加大剂量再次实验。如出现中毒现象，作用也明显，则应降低剂量再次实验。在一般情况下，在适宜的剂量范围内，药物的作用常随剂量的加大而增强。所以有条件时，最好同时用几个剂量作实验，以便迅速获得关于药物作用的较完整的资料。如实验结果出现剂量与作用强度之间毫无规律时，则更应慎重分析。 3.剂量换算的方法 (1) 人与动物对同一药物耐受性不同，一般动物的耐受性要比人大，单位体重的用药量动物比人要高。必须将人的用药量换算成动物的用药量。一般可按下列比例换算： 人用药量： 1 小鼠、大鼠： 25～50 兔、豚鼠： 15～20 狗、猫： 5～10 以上系按单位体重口服用药量换算。如给药途径为静脉、皮下、腹腔注射，换算比例应适当减小些。 举例： 一个成年人按60公斤体重,如果口服12ml，大鼠灌胃量？ 12／60× 200／1000＝0.04 0.04 ×（25-50）=1-2ml 按动物体表面积计算的方法: 人的体表面积跟体重有关系,动物的体表面积也与体 重有关系。动物的用药量可以通过体表面积进行换算， 公式如下： A＝K×（W2／3／10000） 　　　　 A＝体表面积， m2 W=体重，ｇ　 　 　K=常数： 　 小鼠