蛋白质大分子印迹琼脂糖基聚合物微球的研究.pdf

中文摘要 以琼脂糖为蛋白质大分子印迹基材，色拉油为油相，分别以卵白蛋白(EA)、 牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(Lyz)为模板分子，采用反相悬浮凝胶法制备 了的蛋白质大分子印迹琼脂糖聚合物微球(P．AgrMIPMs)，优化了成球条件及 模板分子脱除液。研究了EA。AgrMIPMs的特异重结合性并探讨了影响因素。比 较了各不同P．AgrMIPMs对各自目标分子的重结合动力学、平衡重结合量和印 MIPMs在不同底物浓度中的重结合动力学， 迹效率．时间曲线，考察了Lyz．Agr 并用EA．AgrMlPMs和BSA．AgrMIPMs做了目标分子交叉重结合实验。采用光 学显微镜观测了微球形貌与粒径大小，用UV分光光度计检测并尝试了用电导率 仪检测重结合实验中蛋白质浓度的变化。 实验表明，油水比、分散剂、搅拌速度和琼脂糖浓度是影响其粒径和分布的 重要因素，当琼脂糖溶液浓度为2．5％(w／V)、油水比为4／1、搅拌速度为420印m 时成球效果最好，此时微球平均粒径为240岬，多分散指数为O．24；SDS (0．001mol／L)／Nacl(0．00lmol／L)缓冲溶液适合用于大分子印迹琼脂糖的脱除液； 三种印迹微球都有一定的印迹效果，但重结合性因模板分子的不同而不同；研究 还表明环境电解质的种类、温度等因素对EA．AgrMlPMs重结合性能有一定的影 响。 根据三种蛋白质印迹微球对各自目标分子的平衡重结合量、重结合动力学比 MIPMs的竞争动力学实验和重结合热力学研 较以及BSA．AgrMIPMs与EA．Agr 究结果，我们讨论了琼脂糖为蛋白质大分子印迹基材时的特点，推测该类印迹微 MIPMs的重结合选择性 球重结合过程中印迹孔穴起主导作用。另外，由P．Agr 能分析，BSA．AgrMIPMs和EA．AgrMIPMs都有一定的重结合选择性，其中相 9和1．34。 对分离因子p分别为1．1 关键词：蛋白质大分子印迹；琼脂糖；大分子印迹琼脂糖聚合物微球；蛋白质； 反相悬浮凝胶法；特异重结合；印迹效率；卵白蛋白(EA)；牛血清白蛋白(BSA)； 溶菌酶(Lyz) AB STRACT Protein macromolecularlyimprintedagarose．based microspheres polymer reVersed saladoil (P—A矿MIPMs)were suspension preparedby phase gelation，using as serum albumin(EA)，boVinealbumin(BSA)and medium，usingegg lysozyme conditionsofthe (Lyz)astemplatesrespectiVely，the preparationprocessincluding amountof ofoilto rate concentration，and dispersants，ratiowater，agarose stimng were remoValsolutionfor was