630020307高级外科学刘振东干细胞与脊髓损伤修复.pptVIP

* * Welcome 细胞生物学与脊髓损伤修复 ? 中南大学湘雅三医院骨科 刘振东 ? 灰质：神经元细胞、胶质细胞和血管 白质：神经轴突、少突胶质细胞、星 形胶质细胞和血管 上行传导束：传导身体各部位的感觉 至大脑 下行传导束：传导运动信息至肌肉 脊髓结构与功能 1、? 灰质内神经元死亡，凋亡，多 发生在受损节段内。 2、?轴突变性：发生在损伤点远端的 轴突变性，称为Wallerian变性 或顺行性变性。而发生在与胞体 相连的近端称为逆行性变性。 ? 脊髓对损伤的反应 C4/C5脊髓损伤20年后，在脊髓中央形成空洞。 慢性脊髓损伤的反应 病段脊髓瘢痕或空洞形成 1. 防止继发性损伤：神经营养因子及药物 2. 脱髓鞘的代偿：药物保护髓鞘细胞 3. 去除抑制因素：拮抗生长抑制因子 4. 促神经轴突再生：神经生长因子 5. 轴突再生的导向：神经再生导向因子 6. 搭桥：植入导向支架，促进轴突再生 7. 死亡神经细胞的置换: 神经干细胞，胚胎干细胞， 嗅鞘细胞，雪旺氏细胞等等 8. 基因治疗 脊髓损伤修复的策略 神经系统的移植包括： 组织移植：胚胎、胎儿、新生儿、成体。 细胞移植：胚胎干细胞、神经干细胞、骨髓干细胞、嗅鞘细胞、雪旺氏细胞等等。 细胞及组织移植 神经干细胞与脊髓损伤修复 ? NSC的主要特征包括: 来自神经系统或能产生神经组织,可分化为中枢神经系统内神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞三种主要的神经细胞; 能自我更新; 通过不对称分裂产生除自身以外的其它细胞。NSC 通过不对称分裂产生一个新的干细胞和一个祖细胞(progenitor cell) ,对称分裂则产生两个干细胞或两个祖细胞。祖细胞是相对于干细胞而言,其分化能力和自我更新能力受到一定限制,仅具有单向或双向分化潜能,或其干细胞特性只能维持较短的时间。在发育时间上,应是NSC 早于神经祖细胞。前体细胞(precursor cell) 是一类在发育进程中较其它细胞处于更早阶段的细胞,可统称干细胞和祖细胞。 NSC的特异性标志: 1.胞质内抗原巢素(nestin): Nestin 属神经丝蛋白,仅在胚胎早期的神经上皮表达, 是目前鉴定NSC 的主要的分子标志。 2.表面抗原低亲和力生长因子受体(low affinity nerve growth factor receptor ,LNGFR) 即p75。 A：NSC经培养7天后，在培养中 形成神经小球. B：传代后，再培养7天，可见已 分化的神经细胞出现. 大鼠NSC的分化（一） BrdU和nestin双重免疫荧光染色（加BrdU培养3天） 1．? 单箭头：BrdU（+）/nestin（+）细胞 2．? 双箭头：BrdU（+）/nestin（-）细胞 ? 大鼠NSC的分化（二） NSC分化成为神经元和星形胶质细胞 A：?III—tubulin免疫染色，箭头指?III—tubulin（+）神经元。 （加NT4培养7天） B：MAP2免疫染色，箭头指MAP2（+）神经元。（加NT4培养7 天） C：GFAP免疫染色，GFAP（+）星形胶质细胞。（不加NT4培养 7天） ? 大鼠NSC的分化（三） ?III—tubulin（+）神经元细胞/GFAP（+）星形胶质细胞定量分析 A：NTs促进?III—tubulin（+）神经元分化。（加NTs养7天） B：NTs抑制GFAP（+）星形胶质细胞分化。 ? 大鼠NSC的分化（四） GABA和ChAT免疫细胞染色（加NT4培养14天） A：GABA（+）神经元 B：ChAT(+)神经元 ? 大鼠NSC的分化（五） A：重力挫伤后1天的脊髓横 切面（低倍） B：植入后1天在挫伤处可见 NSC（BrdU 阳性） C：植入后7天在距挫伤处 4mm尾端发现NSC D：NSC可继续移行至8mm ? NSC植入受损后的存活和移行 1、? NSC具有多项分化潜能，分化成为神经细胞和胶质 细胞。 2、? 在体外NTs促进NSC分化成为神经细胞。 3、? NSC移植后可在脊髓中成活并可通过损伤区域，向 尾端移行。 4、? 新生儿神经组织中存在NSC并可分离获取。 讨 论 *