乙型脑炎病毒非结构蛋白ns5与宿主蛋白相互作用的研究-预防兽医学专业论文.docx

乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5与宿主蛋白相互作用的研究目录摘要iAbstract．．．． ．．． ． ．． iii缩略语表(Abbreviation)．．V第l章文献综述11．1乙型脑炎病毒简介．．11．2乙型脑炎的流行病学特性．．11．2．1乙型脑炎的流行特征．11．2．2乙型脑炎的传播特征21．3乙型脑炎的致病机制31．3．1 JEv在机体内的增殖与扩散．31．3．2 JEV引起神经炎症反应的分子机制．41．4乙型脑炎病毒的分子生物学特性．．51．4．1基因组结构与功能51．4．2蛋白质功能51．4．3病毒的入侵和复制过程71．5乙型脑炎临床症状与病理变化一71．5．1乙型脑炎的临床症状71．5．2乙型脑炎的病理变化81．6乙型脑炎的防治一81．7乙脑病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展一91．7．1腰V蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒入侵的影响．91．7．2 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒复制的影响．91．7．3 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对神经炎症反应的影响．．101．7．4 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对天然免疫的影响111．8病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究方法1 11．8．1酵母双杂交系统．．121．8．2串联亲和纯化(TAP)12第2章乙型脑炎病毒NS5蛋白与HSP70相互作用的研究142．1前言．142．2材料和方法152．2．1材料152．1．1．5主要缓冲液及其配制182．2．2实验方法．．182．3结果与分析23万方数据乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5与宿主蛋白相互作用的研究 2．3．1利用串联亲和纯化与质谱分析结合法筛选与JEV NS5蛋白相互作用的宿 主蛋白．232．3．2 JEV NS5与宿主蛋白相互作用的验证242．3．3 HSP70蛋白可以与JEV NS5的RdRp结构域直接相互作用252．3．4 HSP70与JEV复制复合体组成成分相互作用252．3．5 HSP70正调控JEV基因组的复制282．3．6 HSP70可稳定JEV复制复合体的组成成分3 12．3．7 JEV感染刺激HSP70蛋白的表达312．4讨论．．332．5小结．．35第3章JEV NS5蛋白抑制宿主蛋白入核运输的研究．．363．1前言．．363．2材料与方法．373．2．1材料．373．2．2实验方法393．3结果与分析．423．3．1 JEV抑制含经典NLS的报告蛋白入核．．423．3．2 JEV NS5蛋白抑制3×SV40NLS．2xEGFP的入核．．433．3．3压V NS5与核运输蛋白KPNA2、KPNA3、KPNA4相互作用453．3．4 JEV NS5抑制p50与p65的核定位463．3．5 JEV NS5抑制NF．1cB的活性483．3．6 JEV NS5通过直接靶向p50／p65来抑制NF．1cB的活性483-3．7 JEV NS5抑制pS0／p65与KPNA3、KPNA4的相互作用．493．3．8 JEV NS5通过靶向KPNA2、KPNA3、KPNA4抑制I型干扰素的分泌493．3．9 KPNA2、Ⅺ)NA3、ⅪNA4的过表达抑制陋V的复制5l3．4讨论．．5 13．5小结．．53第4章依那西普对乙型脑炎的治疗作用的研究．．544．1前言．．544．2材料与方法．554．2．1实验材料554．2．2实验方法564．3结果与分析．594．3．1依那西普降低JEV感染神经元／胶质细胞引起的炎症反应．604．3．2依那西普减轻JEV感染小鼠脑组织的病理症状614．3．3依那西普降低压V感染小鼠脑部炎症因子的分泌624．3．4依那西普对JEv感染小鼠脑组织中胶质细胞和神经元形态和数量的影响II万方数据乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5与宿主蛋白相互作用的研究634．3．5依那西普减少JEV感染小鼠脑组织中神经元的凋亡．．654．3．6依那西普抑制JEV感染引起的炎症与凋亡信号通路的激活．674．3．7依那西普可缓解JEV感染所引起的血脑屏障通透性的改变．684．3．8依那西普可降低小鼠脑组织中的病毒载量一684．3．9依那西普可减轻JEV感染小鼠的临床症状并降低其致死率．694．4讨论．694．5小结．72结论73参考文献74附录87致谢90III万方数据乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5与宿主蛋白相互作用的研究摘要乙型脑炎病毒(Japanese eneephalitis virus，JEV)属于黄病毒科黄病毒属，是一 种危害严重的人兽共患虫媒性传染病病原，感染人和动物后可以引起乙型脑炎(简 称乙脑)。该病是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一，对人类健康造成巨大威胁， 同时乙脑也是危害我国养猪业的重大疫病之一。JEV感染引起机体中枢神经系统过 度炎症反应是其致病的主要原因，但目前，具体的致病机制尚不太清楚。近年研究 表