新型功能化dna探针用于转录因子的荧光生物传感研究-分析化学专业论文.docx

山东大学博士学位论文2．2．3．2 Ag+-sTDMs的构建及其与目标物NF．KBp50的结合反应、荧光强度的的测定．302．2．3．3t唧l“DNA及Ag+一sTDMs的uV熔解曲线的测定．312．3结果与讨论3l2．3．1Ag+．STDMS用于转录因子的灵敏检测的可行性研究．．3l2．3．2反应条件的优化332-3．2．1Ag+浓度的优化一332．3．2．2BHQ-1．T_FO长度的优化332．3．2．3BHQ．1一TFO浓度的优化342．3．2．4pH的优化352．3．3检测方法的分析性能352．3．3．1荧光强度对不同浓度目标物的响应以及线性范围的确定．352．3．3．2精密度和重现性的考察．372．3．3．3特异性考察．372．3．3．4实际样品测定．382．4结{仓402．5参考文献一41第三章基于G0荧光开关的多功能G四倍体发夹探针用于转录因子的免标记、灵敏检测．．z133．1引言．433．2实验部分一443．2．1仪器装置443．2．2材料与试剂453．3实验步骤一463．3．1DNA的分装、储存及工作溶液的配制．．463．3．2MGHP在Go表面的吸附、复合物的解离、NMM的插入及荧光测定．463．3．3反应过程的聚丙烯酰胺电泳表征473．4结果与讨论一473．4．1基于Go荧光开关的MGHP用于转录因子的免标记灵敏检测的可行性研究．．47“万方数据山东大学博士学位论文3．4．2实验条件的优化503．4．2．1MGHP环部长度的优化503．4．2．2MGHP末端信号载体长度的优化5l3．4．2-3G0浓度的优化一5l3．4．2．4G0猝灭时间的优化。523．4．2．5目标物结合时间的优化．533．4．2．6 NMM浓度的优化．533．4．3检测方法的分析性能543．4．3．1线性范围的确定．543．4．3．2特异性考察543．4．3．3精密度和重现性考察553．4．3．4抑制效应考察．553．4-3．5实际样品的测定563：5结讼583．6参考文献59第四章共区域化识别激活的级联信号放大用于转录因子的高灵敏检测6l4．1引言一6l4．2实验部分一634．2．1仪器装置634．2．2材料与试剂634．2．3实验步骤654．2．3．1高压灭菌一654．2．3．2DNA的分装、储存及工作溶液的配制一654．2．3．3共区域化识别激活的级联信号放大及荧光测定．654．3结果与讨论一664．3．1共区域化识别激活的级联信号放大用于转录因子的高灵敏检测的可行性664．3．2实验条件的优化674．3．2．1链置换辅助序列的筛选674．3．2．2目标物结合时间的优化．704．3．2．3指数滚环扩增(ERcA)时间的优化．71iii万方数据山东大学博士学位论文4．3．2．4环状模板浓度的优化．724．3．2．5Phi29DNApolymeraSe用量的优化．．724．3t3检测方法的分析性能734．3．3．1线性范围的确定．734．3．3．2特异性考察．734．3-3’3精密度和重现性考察．744．3．3．4抑制效应考察．744．3．3．5回收率测定754．3．3．6实际样品的测定．764．4结论．774．5参考文献．．78第五章协同的掩蔽效应和结合保护效应介导的级联信号放大用于转录因子的高灵敏检测8l5．1引言一815．2实验部分．．825．2．1仪器装置825．2．2材料与试剂825．2．3实验步骤855．2-3．1高压灭菌．855．2．3．2DNA的分装、储存及工作溶液的配制855．2．3．3协同的的掩蔽效应和结合保护效应介导的级联信号放大及荧光测定．855．3结果与讨论一865．3．1协同的的掩蔽效应和结合保护效应介导的级联信号放大高灵敏检测转录因子的可行性研究．865．3．2实验条件的优化875．3．2．1掩蔽链的优化875．3．2．2掩蔽时间的优化．885．3．2．3目标物结合时间的优化．895．3．2．4ERCA时间的优化．895．3．3检测方法的分析性能905．3．3．1线性范围的确定．90iv万方数据山东大学博士学位论文5．3．3．2特异性考察．915．3．3．3精密度和重现性考察．9l5．3．3．4抑制效应考察．925．3．3．5回收率测定．935．3．3．6实际样品的测定935．4结论．955．5参考文献96致{射．99博士期间发表论文lOlV万方数据山东大学博士学位论文CONTENTSAbstract(inChinese)IAbStract(inEn91ish)VSymbolandAbbreViation．IXChapterl。Preface．．11．1ImroductionofTr锄scriptionfactors一11．I．1Definition，mechanismofactionandsigni