选修三动物细胞培养.pptVIP

第二章 细胞工程 * 细胞工程 利用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平和细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门科学综合技术。 植物细胞工程 动物细胞工程 植物组织培养 植物体细胞杂交 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体的制备 第一节 动物细胞培养 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，自身的健康皮肤很有限，使用他人的皮肤来源不足，而且会产生排异反应。怎样才能获得大量的自身健康细胞呢？ 许多动物的细胞能分泌蛋白质，如抗体、细胞因子等，但是单个细胞产生的蛋白质量很少，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？ 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 5、胰蛋白酶的作用是什么呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 思考题 6、胰蛋白酶的作用是什么呢？ 没有 有 8、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 9、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 能 注意时间的控制 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛 思考题 不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 7、能不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 剪碎组织 单个细胞 细胞悬液 10代细胞 细胞株 细胞系 细胞增值 无限传代 培养液 一、细胞培养的基本过程 胰蛋白酶 分散成单个细胞 原代培养 传代培养 50代细胞 小常识 1、贴壁生长 指大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。 要求细胞培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒，易于贴附。 2、接触抑制 指贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，逐渐走向死亡。 要求传代培养 1、无菌、无毒的环境 二、细胞培养的基本条件 2、营养物质 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸 促生长因子 动物血清 3、温度和PH 添加一定量的抗生素，定期更换培养液 哺乳动物多为36.5±0.5度, 多数细胞生存的最适pH为7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95% O2和5% CO2 ） 天然成分，可保证细胞顺利地生长增殖 CO2可维持培养基的pH 三、细胞培养的概念 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组 织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和增殖。 四、细胞培养的应用 1、大规模培养生产生物制品 2、作为基因工程中的受体细胞 3、检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4、为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 如：酶、病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 五、细胞的冻存及复苏 1、保存——超低温冻存法 -196℃的液氮中 2、复苏 37℃温水中解冻 在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。  目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油。 按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。 冻存 *