基因工程制药中常用上、下游技术.ppt

重组质粒的宏观逃逸率 重组质粒的宏观逃逸率 = 不携带重组质粒的细胞数 / 总细胞数 ×100 % 例：每代基因工程菌的宏观逃逸率为0.1%，不含重组质粒的受体细胞其比生长速率是含重组质粒细胞的1.5倍，在分裂第25代时的宏观逃逸率为99.9%！ 大规模发酵已逐渐不允许使用抗生素进行压力选择。加重了问题的严重性。 * 改进载体宿主系统 增加质粒拷贝均衡分配（Par）基因。 正确设置载体上的多克隆位点，防止外源基因插入质粒上的稳定区。 选择对重组质粒耐受性好的宿主菌。 除去宿主菌染色体DNA上的转座元件。 * 施加选择压力 抗生素添加法---利用抗性基因，将抗生素加入到培养体系中。 抗生素依赖法---将宿主菌诱变成抗生素依赖突变株，在质粒上引入该抗生素的非依赖性基因。 营养缺陷法---灭活某种细胞生长必须的基因，获得营养缺陷型突变株。将灭活的基因克隆到质粒上，建立互补关系。 * 基因工程菌的大规模培养 基因工程下游技术的开始 * 原始种子库和生产种子库 生物制品生产采用种子批系统。原始种子库应验明其纪录、历史、来源和生物学特性。从原始种子库传出、扩增后动干保存的为生产用种子库。生产用种子批的生物学特征应与原始种子批一致。每批生产用种子批均应按规程要求保管、鉴定和使用。 * 制造菌种库的建立 从原始菌种库传出，经扩大后冻干保存，或由上一代制造菌种库传出，扩大后冻干保