秦海峰《生物化学精品教学》理工大-蛋白质.pptVIP

Cation- exchange column 练习 含有Lys、Ile和Glu的混合物通过阳离子交换法分离，使用pH3.5的阳离子交换柱，缓冲溶液也是pH3.5，哪一种氨基酸会先从住上洗脱？是否还需要其他的步骤洗脱氨基酸？ 谷氨酸先被洗脱，因为 pH值最接近pI。 Ile和Lys会带正电 与柱结合，洗脱Ile需要将pH提高至6左右；洗脱Lys须将pH升高至11。 2.电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 在一定的电场和介质中，蛋白质迁移速度与蛋白质分子量、所带电荷及分子形状有关。 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 PAGE 电泳结果 聚丙烯酰胺凝胶电泳 丙烯酰胺和交联试剂（甲叉双丙烯酰胺）在过硫酸铵催化下聚合而成。 可以控制孔径大小 d. 等电聚焦电泳（IFE） 蛋白质在具有pH梯度的介质中进行分离。在电场中，每种蛋白质成分将移向并停留在等于其等电点的pH处，形成一个很窄的区带。 用途：按等电点分离蛋白质 鉴定蛋白质等电点 血红蛋白的别构现象 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称氧饱和度）。氧饱和度大小取决于氧分压（Po2）的高低。 肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线 1.P50 Y=0.5时，即肌红蛋白一半被饱和时的氧压，称为P50。 2.氧解离曲线的特点 血红蛋白：S形曲线 肌红蛋白：双曲线 是非题与填空： 1.蛋白质一级结构是指多肽链的氨基酸组成和二硫键的位置。（） 2.还原型谷胱甘肽为 肽，含有的活性基团为 。 3.同源蛋白质是指来源于同一类生命体的蛋白质。（） 4.同源蛋白质之间有着共同的基本结构和生物功能。（） 5.镰刀型细胞贫血病的分子基础是血红蛋白?-亚基出现异常。（） 6.一对二面角决定了两个相邻肽单位的相对位置。（） 7.Asp的pK1=2.09，pK2= 3.86，pK3=9.82，其pI等于_______。 8.3.613 helix 中的数字是指 。 9.?-折叠片中所有肽键都参与氢键的交联。（ ） 10.肌红蛋白含有 辅基。 11.只有二价铁的血红素才能结合氧。（ ） 12.血红蛋白四级结构完整时方能执行正常输氧功能。（ ） 13.蛋白质必须具备四级结构方能执行正常功能。（ ） 14.下列有关蛋白质β片层结构的叙述正确的是 A.主链骨架呈锯齿状 B.两个相邻的肽平面呈折纸状 C.β片层结构是一种较伸展的肽链结构 D.若干矩齿状肽链骨架平行或反平行排列，链间靠氢键维系 E.以上都正确 15.关于蛋白质分子三级结构的描述，其中错误的是 A.具有三级结构的多肽链都具有生物学活性 B.天然蛋白质分子均有这种结构 C.三级结构的稳定性主要是次级键维系 D.亲水基团多聚集在三级结构的表面 E.决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基 第六节 蛋白质的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Protein 一、蛋白质的两性电离 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 * 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点 1.Pr分子颗粒大小1-100nm之间, 属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。 原因： 二、蛋白质的胶体性质 2.表面形成水化层 3.表面同种电荷的斥力 除去这后两个因素,Pr就会发生沉淀。由于胶体溶液中的Pr不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液