荧光实时定量PCR检测HULClncRNA方法的建立.docVIP

实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA方法的建立及初步应用 汪先桃 郭变琴 梁勤东 涂植光 (重庆医科大学检验医学院 临床检验诊断学教育部重点实验室 重庆 400016) ［摘　要］目的：建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA HULC的方法，探讨其在作为肝癌标志的应用价值。方法：根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列, 设计HULC基因的特异引物, 构建HULC基因的T克隆载体，命名为pMD18-T-HULC；以pMD18-T-HULC为实时荧光定量PCR检测HULC的标准品，建立实时荧光定量PCR检测HULC的方法并进行方法学评价。应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中HULC lncRNA的表达。结果：HULC实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8×103拷贝/L, 线性范围为1.8×103拷贝/L~4.6×109拷贝/L；该法的批内变异系数（CV）2.0%, 批间CV8.0%。其在肝癌组织和肝癌细胞株起始表达量为(7.6±3.1)×105拷贝/L ~(5.6±3.2)×106拷贝/L，明显高于其它癌和癌旁组织HULC lncRNA表达量（1.8×103拷贝/L）。新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(6.7±2.4)×105拷贝/L]，但在膀胱癌组织中表达低（1.8×103拷贝/L）。结论：成功建