用斜入射光反射差法无标记实时以及高通量探测生物芯片-光学工程专业论文.docx

摘要摘要目前，生物领域中主要以荧光标记法为代表的标记检测方法来探测生物微阵列，但是标记物会影响被测生物分子的结构和特性。因此，迫切需要一种无标记高通量检测生物芯片的技术。本论文以斜入射光反射差方法（ObliqueIncidenceReflectivityDifference，OIRD）为研究方法，研究了生物大分子之间的相互作用，并得到了以下结论：1、采用斜入射光反射差方法来研究小鼠免疫球蛋白芯片上的三种浓度与0.01mg/ml的GoatAnti-MouseIgG相互作用的过程，该实验结果表明了OIRD不仅可以区分不同点样浓度的蛋白质分子，还可以实时检测生物分子的相互作用过程并获得反应动力学曲线。2、探测了由五种浓度的小鼠免疫球蛋白（MouseIgG）制成的共500个样点的蛋白芯片与0.01mg/ml的山羊抗小鼠免疫球蛋白（GoatAnti-MouseIgG）相互作用的过程。研究结果表明，斜入射光发射差方法可以无标记高通量探测500个样点的MouseIgG蛋白芯片的特异性反应，还可以区分不同点样浓度的蛋白质分子。3、研究由兔子免疫球蛋白（RabbitIgG）、小鼠免疫球蛋白（MouseIgG）和马免疫球蛋白（HorseIgG）制备成8400个样点的生物芯片与山羊抗马免疫球蛋白（GoatAnti-HorseIgG）溶液相互反应的过程。实验结果表明斜入射光发射差方法能够成功地高通量检测8400个样点的蛋白芯片，以及无标记检测不同种类的蛋白芯片的特异性结合。4、利用OIRD无标记检测了由四种浓度的HorseIgG蛋白芯片以及1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液作为对照制成的7000个样点的蛋白芯片与Anti-HorseIgG相互作用的过程。结果表明，斜入射光反射差方法可以无标记高通量扫描7000个样点的HorseIgG蛋白芯片与Anti-HorseIgG溶液的特异性反应以及区分该芯片上的点样浓度的大小。上述结果表明，斜入射光反射差方法不仅能够无标记实时检测生物大分子相互作用的动力学过程，还能够无标记高通量扫描生物芯片。关键词斜入射光反射差方法无标记实时探测高通量扫描生物分子反应AbstractAbstractCurrently,inthefieldofbiologymostmicroarraysaredetectedwithlabeltechniques,whicharerepresentedbyfluorescence,buttheextrinsiclabelprobablyimpactsthebiomolecularcharacteristicsandthenaturalactivities.Therefore,thetechnologywhichcanlabel-freeandhigh-throughputdetectmicroarrayswillbe needed.Inthisthesis,weuseobliqueincidencereflectivitydifference(OIRD)methodtostudytheinteractionbetweenbiologicalmacromolecules.The mainconclusionsaredescribedasfollows:WeuseOIRDmethodtostudybio-chip,whichispreparedwithMouseIgGsolutionwithdifferentconcentrationsandinteractwithGoatAnti-MouseIgGof0.01mg/ml.TheexperimentsuggeststhatOIRDmethodcannotonlydistinguishtheconcentrationsofmoleculesbutrealtimemonitortheinteractionofbiomoleculesinordertoobtainthedynamiccurves.The interactionbetweenMouseIgGwithdifferentconcentrationsand0.01mg/mlGoatAnti-MouseIgGbasedonbio-chipwasdetectedbyOIRD,suggestingthatthemethodcanlabel-freeandhigh-throughputdetectMouseIgGchipwith500spotsanddistinguishtheconcentrationsofproteinmolecules.Wefabricatedthe biologicalchipwith8400samplesprintedbytheRabbitIgG,MouseIgG,andH