试验五肉的品质评定及其超高压处理技术.DOC

动物性农产品加工 实 验 指 导 （自编教材） 聊城大学农学院实验管理中心编印  目 录 实验一 双水相萃取法富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的研究 1 实验二 超滤法生产大豆浓缩蛋白 4 实验三 猪胰脂肪酶的分离纯化及其性质研究 5 实验四 超高压技术应用于食品新产品开发 8 实验五 肉的品质评定及其超高压处理技术 10 实验六 各种肉制品的加工生产 13 实验七 甜酒酿的制作 17 实验八 果味酸乳的制作 19 实验九 平板菌落计数 21 实验十 原料乳的验收 23 实验十一 各种乳制品的加工 27 实验十二 各种农产品机械与设备的工作原理 35 实验十三 鲜切果蔬抑菌涂膜保鲜实验 37 实验十四 食品包装市场调查 38  一、实验目的 让学生掌握双水相体系的构建和天然产物的提取方法。 二、实验要求 (1)上课前应阅读本任务书中相应的部分，明确实验的内容和要求。(2)根据实验内容阅读教材中的有关章节，弄清基本概念和方法，使实验能顺利完成。 三、实验原理 双水相系统是指某些亲水性高分子聚合物的水溶液超过一定浓度后可形成两相，并且在两相中水分均占很大比例，Albert sson于20 世纪50 年代后期开发了双水相萃取法。70 年代以后，众多科学家发展了双水相萃取技术在生物分离过程中的应用，为蛋白质特别是胞内蛋白质的分离与纯化开辟了新的途径。 四、实验材料、仪器和试剂（粗五号字宋体） 螺旋藻、PEG4000、硫酸钠、氯化钾、分光光度计、50ml量筒4个、500ml烧杯4个、电子天平、NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O 五、实验步骤或方法 1、螺旋藻细胞的破碎及其含量计算 准确称取0. 5 g 螺旋藻粉，加入100 mL p H 为7. 0 的0. 01 mol/ L 的磷酸缓冲液，采用反复冻融(3次) 的方法对藻体细胞进行破碎，在显微镜下观察计数细胞破碎率可达到90 %以上。将破碎的螺旋藻细胞悬浊液于4 000 r/ min 离心20 min，倾倒上清液可得到含藻蓝蛋白的粗提液。测粗提液在620、650 nm下的吸光度，计算藻蓝蛋白的含量。 螺旋藻中以藻胆蛋白吸收光谱的差异作为其检定的标准。藻蓝蛋白( PC) 在620 nm 处有最大光吸收值，其含量测定计算方法如式(1) 所示。藻蓝蛋白的纯度为溶液在620和280 nm 的吸光度的比值。 PC=0.1425*A620 (1) 其中，藻蓝蛋白的质量浓度( g/ L)， A620代表波长在620 nm 处的吸光度。 2、相图的绘制 准确称取质量分数为50%的PEG原液于试管中，加入19%硫酸钠原液，混合，直至试管开始出现混浊为止，计量加入硫酸钠的量，再加入适量水，使体系变澄清，计量加入的水，并继续加入硫酸钠，使系统再次变混浊，如此反复操作，计算达到混浊时PEG和硫酸钠在系统中的质量分数，得出PEG和硫酸钠的相图。 3、双水相萃取方法 在粗提液中加入一定量的PEG和无机盐，充分振荡使成相物质溶解，同时完成了藻蓝蛋白在双水相系统中的分配过程。此双水相系统静置一定时间，当两相达到相分离，分别用移液管抽取上下相的溶液，在波长280、620、650 nm下测吸光度，计算藻蓝蛋白的质量浓度和纯度。最佳提取条件为：12 % PEG4000、15 % Na2 SO4 、1 % KCl。 六、实验结果及数据处理（或实验图像、现象等） 藻蓝蛋白收率、分配系数经双水相系统萃取过的螺旋藻细胞破碎液(粗提液) 中，藻蓝蛋白富集于双水相系统的上相中,因此计算藻蓝蛋白收率( E) 、分配系数( K) 如下式: 　　　 式中的V 代表溶液体积，下标0 ,t ,b 分别代表粗提液、萃取后双水相系统上相和下相的溶液。 绘制PEG-硫酸钠双水相相图，并计算藻蓝蛋白收率( E) 、分配系数( K)。 七、思考题 1、双水相体系的原理是什么？ 2、双水相相图的作用是什么？ 3、双水相萃取法与什么优点？ 参考文献： 刘杨,王雪青,庞广昌,谢卓峰. 双水相萃取法富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的研究. 海洋科学, 2008,32(7):30-37. 附录： 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB） 试剂： NaH2PO4·2H2O ? ? Na2HPO4·12H2O 配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。 （1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取NaH2PO4.2H2O 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。