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第二章工业微生物菌种相关操作 第一节 工业微生物菌种选育 一、工业微生物常用菌种 1、细菌 短杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌等 2、真菌 酵母菌、霉菌 3、放线菌 产生各种抗生素的放线菌、灰色放线菌 二、菌种保藏结构 在全球有多家菌种保藏结构，国内的有：CICC、 CGMCC 国外: WFCC、 ATCC、 NRRL、 NBRC、 CBS、 DSMZ、 NCTC 三、分离筛选菌种 微生物菌种 有用的工业 微生物菌种 土壤中分离菌种具体过程 采样 增殖培养 纯种分离及培养 生产性能测定 地点选择 时间确定 采样操作 控制C源种类 抑制或促进因子 培养条件 稀释分离 划线分离 组织分离 野生型中筛选有用高产菌株 一般孢悬液浓度在106-108 个／mL 敏感性强、变异幅度大、产量高 诱导同步性、微孔过滤法 四、微生物菌种诱变选育 1、诱变一般步骤 变异菌株筛选 出发菌株选择 同步培养 制备菌悬液 诱变处理 诱变剂种类 剂量 初筛、复筛、 平皿快速检测法（纸片培养显色、透明圈、琼脂块培养） 2、营养缺陷性突变株筛选 （1）常用术语回顾 营养缺陷性: 野生型: 原养型: 基本培养基（MM）: 补充培养基（SM）: 完全培养基（CM）: （2）筛选过程 A 抗生素法 B 过滤法 A 逐个检测 B 夹层检出 C 限量补充培养基法 D 影印法 A 类别确定 B 因子确定 诱变处理 淘汰野生型 检出营养缺陷型 营养缺陷型鉴定 第二节工业微生物菌种保藏 通过育种筛选的优良菌种的保藏对于保持菌株性状是必要的。 一、保藏原理：创造有利于菌种休眠的环境条件（低温干燥、缺氧（养）、加保护剂） 二、方法 1、斜面保低温藏： 2、液体石蜡覆盖： 3、液氮超低温： 4、砂土管： 5、冷冻干燥： 1、保藏方法：在斜面上加入经灭菌的石蜡于4°冰箱中。 2、范围：放线菌、霉菌酵、母菌、好氧性细菌 3、期限：随种类各异，一般1-10Y 4、优缺点：简单快捷、时间长；易分解烃类和厌氧菌不适合 1、保藏方法：制备好沙土管、斜面培养物、菌悬液、干燥、火焰封存 2、范围：耐干旱的菌种，像细菌芽孢、放线菌、真菌孢子 3、期限：随种类各异，几年到几十年 4、优缺点：简单，保藏时间久，回复培养方便；对干燥敏感细菌不适合。 此法可以使菌种保藏10年以上。 1、保藏方法：于4°冰箱中 2、范围：细菌、放线菌、霉菌、酵母菌 3、期限：随种类各异，一般1-6M 4、优缺点：简单快捷； 频繁转接导致退化和污染 此法需要特殊设备，而且液氮消耗大，操作费用高 二、菌种退化和复壮 随着菌种的传种接代的进行，菌种本身的一些优良性状可能会发生负突变。 1、菌种退化现象 2、菌种退化的原因 3、防止退化的措施 4、退化菌种复壮 1、菌落和细胞形态改变； 2、生长缓慢、产孢越来越少甚至丧失产孢能力； 3、代谢活动、代谢生产能力减少、对寄主寄生能力下降。 1、控制每个性状的基因发生负突变； 2、退化是一个量变到质变的过程； 3、细胞代谢水平与基因突变密切。 1、控制传代次数； 2、合适培养条件； 3、利用不同类型细胞传代； 4、采用有效菌种保藏方法。 第三节 微生物一般操作 一、接种 1、接种工具 2、接种方法 （1）斜面接种 （2）液体接种 （3）穿刺接种 （4）点植接种 （5）平板划线接种 （6）平板倾注接种 （7）平板涂布接种 （8）注射接种 （9）活体接种 二、分离纯化 1、平板划线法 2、倾注平板法 3、涂布平板法 4、富集培养法 5、厌氧法 作业 书本30页3、8、9、10、11、13、14、15