中国医科大学《免疫学》实验四 抗体的应用.pptVIP

实验四 抗体的应用;主要内容;溶血反应;实验材料;1.步骤;2 观察现象;利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动 状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、 快速定量分析，同时对特定群体加以分选 的现代细胞分析技术。 ;一、原理;二、流式细胞仪构造;流动室及液流驱动系统 ;激光光源及光束形成系统 ;光学系统 ;;信号检测系统 ;前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 反映被测细胞的大小,它由正对着流动室的光电二极管装置接收并转变为电信号 侧向角散射（SSC, Side Scatter） 反映被测细胞的细胞膜、细胞质、核膜的折射率和细胞内颗粒的性状,是指与激光束正交90°方向的散射光信号。;Forward Angle Light Scatter;90 Degree Light Scatter;自发荧光：微弱 特异荧光：是细胞样本经标有荧光素的单克隆 抗体染色后经激光激发发出的荧光， 它是我们要测定的荧光,荧光信号 较强。 这两种荧光信号的同时存在是我们测定时需要 设定阴性对照的理由,以便从测出的荧光信号 中减去细胞自发荧光和抗体非特异结合产生的 荧光。; 流式细胞仪测定常用的荧光染料有多种, 选择荧光染料时必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长(如氩离子气体激光管,它的发射光波488nm,氦氖离子气体激光管发射光波长633nm）。488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）、PI（碘化丙啶）、CY5（化青素）、PerCP(叶绿素蛋白)、ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 ;;三、优点;四、流式细胞术的常见应用范围;;Griess法测NO水平 ;Assay using Griess Reagent;二、试剂与材料;三、实验步骤; 根据所得OD值 拟合NO反应标准曲线，并由标准曲线计算各待测样品的NO含量