中国医科大学《免疫学》实验一：免疫动物.pptVIP

载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 凝集颗粒 用特异性抗原致敏载体，检测标本中的相应抗体 待测抗体 （正向）间接凝集试验 ＋ 用特异性抗体致敏载体，检测标本中的相应抗原的方法 载体 已知抗体 致敏 致敏颗粒 凝集颗粒 待测抗原 （反向）间接凝集试验 实验：玻片法测定血型 目的： 人血型检测 试剂与器材： 人外周血 抗－A及抗－B标准血清 生理盐水 载玻片、采血针、消毒棉球等 实验原理 血型 红细胞血型抗原 血清抗体 A A 抗B B B 抗A O 无 抗A和抗B AB A和B 无 操作方法 准备玻片： 用竹镊子取酒精缸内消毒玻片一张，擦净，晾干。分别加上抗A，抗B 采血： 用无菌采血针刺破指尖或耳垂，用灭菌玻片（饭盒）的三个角分别取血，加入1、2、3 格内。 观察结果： 轻轻摇动玻片，经1～2 分钟后用肉眼观察结果，出现凝集片或颗粒者为阳性，并说明红细胞上有相应的抗原。 播放录像 某些可溶性抗原（培养液、外毒素、血清蛋白）与相应的抗体结合，一定条件下形成肉眼可见的沉淀现象，称为沉淀反应。抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。主要包括：琼脂扩散、环状沉淀、絮状沉淀、免疫电泳等。主要用于抗体效价初步估计和血清Ig的测定。 2、沉淀反应 琼脂在含有电解质的凝胶中，可溶性抗原和相应抗体辐射扩散，形成浓度梯度，在比例适合处形成肉眼可见的白色沉淀线。 沉淀线的外形与反应物的分子量有关，通常趋向分子量较大的一方； 沉淀线的位置与反应物的相对浓度有关，通常靠近浓度较小的一方。 包括：1.单向扩散试验 2.双向免疫扩散试验 琼脂扩散试验 将抗体预先混入琼脂中，铺板，然后在板上打孔，孔中加入抗原。因为抗原能在琼脂中扩散，所以在抗原抗体比例适宜处形成白色沉淀环。环的直径与抗原量成正相关。 单向免疫扩散 结果分析 Ab 18 36 72 144 288 N S 当抗原和抗体加入含有适量电解质的琼脂凝胶的相邻的孔中，它们向四周扩散，若两者相互对应，分子比例适合，在扩散一定时间后在两孔之间相遇并结合生成白色沉淀线。 双向免疫扩散 1.抗原或抗体是否存在； 2.抗原或抗体的纯度；若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线。 结果分析 浓度：抗原浓度越高，形成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越高，形成的沉淀线距抗体孔越远； 抗原或抗体相对分子量：抗原或抗体在琼脂内的扩散受分子量影响，分子量大者扩散速度慢，扩散圈小，局部浓度高，因此形成的沉淀圈弯向分子量大的一方，若二者分子量相等，则沉淀线呈直线； Ab Ag 抗原性质：观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉或相连，可用来判断该两抗原是否有共同成分。 实验：双向免疫扩散实验 目的 定性检测人血清AFP 试剂与器材 1.5％琼脂 人血清样品1和样品2 阳性对照血清 抗人AFP抗体 琼脂板、打孔器，微量加样器，湿盒，温箱 操作： 将4ml琼脂倒入琼脂板中 打7个小孔,约7mm间距 每空加样约10～15μl 放入37℃湿盒孵育约24小时 1 P 2 Ab 1 2 P 7mm 结果分析： 四、实验设计 由学生根据所学知识和文献报道，提出有创新性的科学假设；利用所学习的免疫学理论课和实验课知识，设计实验方案，来证实或证伪科学假设。 具有创新性、科学性和可行性 实验方案内容 免疫学实验课实验设计评价标准? 评价等级 等级描述 分数范围 优 立题依据充分，实验目的明确，有创新性；实验方法选择恰当，技术路线科学、可行；预期试验结果可信；书写规范，语言流畅，专业用词准确，基础知识掌握清楚，文献理解正确。 18-20分 良 立题依据较充分，实验目的明确；实验方法选择恰当，技术路线可行；预期试验结果可信；书写规范，语言流畅，专业用词准确，基础知识掌握较清楚，文献引用适当。 14－17分 可 掌握一定的基础知识，实验方案立题较正确，实验方法尚可，预期试验结果可信，书写欠规范，用词不够准确。 8－13分 差 基础知识掌握欠佳，实验方案立题不正确，实验方法不可行，预期试验结果难以达到，书写欠规范，用词不够准确。与其他论文相同处超过30%。 3－7分 1500字以上 立题依据和实验方法应给出参考文献 参考文献应注明作者、题目、出处、页数等信息 电子版形式上交，附件形式，标题是学号和姓名 查找资料方法 校图书馆网站：CNKI Pubmed Google学术 其他检索网站 按学号入座 讲台 医学免疫学实验课 免疫学教研室 张学星 准时 穿白大衣 贵重物品随身携带 课堂纪律 爱惜实验室设备和器材 注意水、电、煤气 认真做实验记录 课后恢复实验台初始状态 分组值日 要求 T 致敏T细胞 抗体 B 浆细胞 实验内容 抗体的应用