室内种子检验员专业知识讲座第九讲.ppt

重要知识点 转基因种子检测技术流程和主要检测方法。 第一节 概 述 一、植物转基因品种鉴定的重要性 随着生物技术产品(转基因品种)的问世，植物转基因品种鉴定问题日益突出。随着植物转基因品种的不断育成和商业化应用，在种子质量检测中出现了新的挑战，这就是植物转基因品种种子的鉴定问题。 二、转基因作物的发展 根据国际农业生物技术应用服务局（ISAAA）的统计，全球转基因作物栽培面积发展迅速，2004年上升至8100万公顷，占全球可耕地面积的5%，是1996年开始转基因作物播种以来年度第二大增幅(表17-1、17-2)。转基因作物栽培面积从1996年的170万公顷到2004年的8100万公顷，9年间增加了47倍多。在各种作物中以转基因大豆的种植面积最高，2004年达到4840万公顷。2004年世界转基因作物的播种面积以20%速率增长，比2003年增加13.3百万公顷。由于更多的第三世界国家选择播种转基因作物，到2010年底播种面积将会大幅增长。 三、种子批中GMO含量测定的目的* 种子批中GMO含量测定的目的： 一是检测（Detection），确定种子批中是否含有GMOs ； 二是鉴定（Identification），如果检测的结果是阳性的，需要通过鉴定知道GMOs 是否是经授权的，如果未经授权，种子批将被拒绝。如果是经授权，则进一步定量分析； 第二节 检测方法 一、国际规程对转基因种子检验方法采用一种全新的规定 国际种子检验协会（ISTA）对于转基因检测方法的规定采用了一种全新的方法，这种方法称为“以性能为基础检测方法”。以性能为基础的检测方法意味着检验室可以研发和（或）使用一种在国际种子检验规程中还未公布的方法，并且一旦当检验室通过性能数据正式认可该方法后，就可以申请国际种子检验协会授权使用该检测方法。 国际种子检验协会除了发布检验规程外，还发布了“以性能为基础检测方法的实验室认可原则与条件”和“性能数据评价文件”两个文件。 三、检测技术流程（*） 基于PCR的种子样品分析流程如下： 1. 根据 ISTA 规程扦样。扦样前，扦样器等用具必须用吸尘器清扫干净。 2. 选择测定方法和测定方案。一般实验室的鉴定，已经知道目的基因，只针对这一基因进行鉴定，方法有针对性。而商业鉴定，不知道是何种基因转入该作物中，因此，需要制定测定方案。 3. 准备工作样品。至少1000 粒种子重，如玉米可用1千克种子。 谢谢 * * 室内种子检验员知识讲座第 九 讲 转基因种子特定特性测定 随着全球和我国植物转基因品种的推广应用，种子市场必然会出现以假冒真或劣质转基因品种的高价销售问题。这就需要对种子市场的转基因品种进行真假鉴定。同时由于转基因品种随繁育世代的增加而发生遗传稳定性的变化，如基因分离、漂移等现象，使转基因品种纯度降低，所以，当今种子质量检测中对植物转基因品种进行真实性和纯度鉴定是十分必要的。 三是定量（Quantification），即通过定量分析，确定种子批中的GMO是否超过极限值。 关于极限值，欧盟2003年规定常规种子批中含有外来GMO的最大界限值是：甜油菜（sweet rape）0.3%，番茄、甜菜、棉花、菊苣、玉米和马铃薯0.5%，大豆0.7%，其它未经权威机构批准的基因为0.0%。当超过极限值时，种子批应标注出含有“％GMO”。 什么是GMOs 是指凭借现代生物技术获得的遗传材料新异组成的活生物体。实际上就是将外源DNA导入生物体基因组，引起了遗传改变，改变了遗传组成的生物，就是转基因生物。 四、ISTA对GM0测定开展的工作 1.成立GMO测定特别小组和发表了转基因种子检测发展策略 随着全球转基因种子迅速增加和GM0测定任务的日益紧迫，ISTA为适应GM0测定的需要，建立了ISTA GMO测定特别小组(ISTA GMO Test Force)，并发表了转基因种子检测的发展策略。 2.开展能力验证活动 ISTA为了检查全球种子实验室对GM0测定的能力，从2002年5月开始，已完成了4轮ISTA GMO测定能力验证活动(ISTA Proficiency Test On GMO Testing)。前3轮测定转基因玉米种子，第4轮测定转基因大豆，由ISTA配置好样品，送往各实验室进行测试，先后有来自30个国家的90个实验室参加了测试。每次测试的结果，经分析后，在ISTA的种子检验国际期刊（Seed Testing International）中公布，前4轮的样品测定正确率分别为95.4%、96.4%、95.9%和97.1%。目前，第5轮和第6轮能力测试正在进行中。 3.制定 GMO测定国际规程 在GMO测定特别小组中建立了规程工作组，制定转基因种子测定的国际规程。该规程已在2005年于泰国召开的年会上通过，将于20