第26章病毒的诊断检测20101001.pptVIP

第二十六章 病毒感染的诊断 二、标本的处理和运送 1、标本运送：应立即送检，运送标本中注意冷藏。保存于含抗生素的运送液中。不能立即送检时应存放于-70℃低温冰箱或液氮内保存。 2、标本处理：有杂菌标本应用高浓度抗生素处理（4℃）并离心。 1.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 3 细胞培养 细胞培养的优点： 来源方便，容易选择易感细胞。 无免疫力，利于病毒生长。 培养条件易于控制：可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分。 接种量大：细胞可以大量生产，而且还可较久地持续培养。动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制。 加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速，早出结果。 （一）病毒的分离培养 3.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 四、病毒的鉴定 1、病毒种类与型别鉴定 初步鉴定：动物感染范围及潜伏期、对鸡胚的敏感性、细胞形态变化类型、红细胞吸附、病毒干扰现象、血凝性质、理化性质（核酸类型测定、大小形态、乙醚敏感试验、耐酸试验）等。 最后鉴定：主要是血清学方法（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、IFA和ELISA等）和分子生物学方法。 空斑试验：在细胞培养表面覆盖一层半固体物质使细胞病变形成空斑 第二节 检测病毒抗原 免疫荧光检测（IFA） 放射免疫测定（RIA） 酶免疫技术（EIA）等 3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验） 2.中和试验（neutralizing test） 病毒＋中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用 第四节 检测病毒核酸 核酸分子杂交技术 PCR 如HBV、HCV、HSV、CMV等的检测。 病毒的快速诊断及应用 形态学检查 电镜：如轮状病毒、疱疹病毒、甲、乙型肝炎病毒等。 光镜：痘病毒及包涵体检查 检查抗原 HBV、 IgM型抗体检测 HAV、风疹病毒和针对EBV早期抗原的抗体EA抗体 病毒核酸的检测 HSV、HPV、HBV 第二十六章 病毒感染的诊断 第三节 检测病毒抗体 PCR cycler 标本采集 分离培养鉴定 快速诊断 鸡胚培养 血凝试验 血凝抑制试验 细胞培养 CPE 电镜检测 中和试验 免疫荧光 TCID50测定 Pfu测定 动物接种 发病情况 中和试验 免疫学检测 ID50测定 LD50测定 形态学 电镜观察病毒颗粒 光学显微镜观察包涵体 病毒成分检测 抗原检测 ELISA IFA RIA WB 核酸检测 核酸电泳 核酸杂交 PCR 基因芯片 基因测序 抗体检测 中和试验 ELISA IFA RIA WB 病毒感染的检查程序 * 内容 提要 检测病毒颗粒 检测病毒成分（抗原、核酸） 检测病毒抗