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第二章 紫外—可见分光光度法 光是一种电磁波 整个电磁波包括： 光子的能量与波长的关系（反比） 例：计算波长为200 nm的光子的能量 解： 四、定量分析 ?S为背景吸收 切光器 吸收池 光源 检测器 单色器 单色器 2. 双波长分光度计 特点：可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数光谱、不需参比液、克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。 国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型 ?分光光度计校正 仪器使用过一段时间后波长和吸光度出现漂移，要进行校正。 波长校正镨玻璃或钬玻璃都有若干特征的吸收峰，可用来校正分光光度计的波长标尺，前者用于可见光区，后者则对紫外和可见光区都适用。 ?吸光度校正可用K2CrO4标准溶液来校正吸光度标度。将0.0400gK2CrO4溶解于1L的0.05mol·L－1KOH溶液中，在1cm光程的吸收池中，在25℃时用不同波长测得的吸光度值（有表可对） 。 2.5 分析条件选择 一.仪器测量条件选择 测量波长的选择a. 选择最强吸收带的最大吸收波长λmax b. 如果λmax处有干扰，应选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。 2.吸光度范围选择 最佳吸光度范围 0.2～0.7(T％为65～20％) ( ， 二、反应条件选择 1.显色剂选择原则 显色剂与待测离子生成配合物组成恒定、稳定性好、吸收能力强，即ε大、显色剂与配合物的吸收波长有明显的差别，一般要求 Δε ＞60nm。 2.显色剂用量 形成逐级配合物时，显色剂的用量关系较大，一般就需过量较多或必须严格控制用量 。 3.溶液酸度（配位数和水解等与pH相关）。 4.显色时间、温度、放置时间 参比溶液的选择 why使用参比溶液 只有使用参比溶液，才能真正反映待测溶液的吸光度值。 1.溶剂参比 当组成简单，共存组分很少，显色剂没有吸收时， 可消除溶剂、吸收池等因素的影响。 2. 试剂参比 ?如果显色剂或其他试剂在测定波长有吸收，按显色反应 同的条件，只是不加入试样溶液。 消除显色剂的吸收影响。 3. 试样参比????如果试样基体（除被测组分外的其它共存组分）在测定波长处有吸收，而与显色剂不起显色反应时可按与显色反应相同的条件处理试样，只是不加显色剂，作为参比溶液。这种参比溶液适用于试样中有较多的共存组分，加入的显色剂量不大，且显色剂在测定波长无吸收的情况。4. 平行操作溶液参比????用不含被测组分的试样，在相同条件下与被测试样同样进行处理，由此得到平行操作参比溶液干扰及消除方法。 小结： 参比溶液选择原则： 凡是有色的溶剂或显色剂或基底液，应尽量消除对测定配合物的吸收影响。当作为参比溶液时，可扣除这种影响。 如果仍有干扰，则可采取下列方式： 红移：使化合物的吸收波长向长波方向移动效应。 影响红移因素： 1、引入助色团 引入n—π共轭，使分子整体共轭效应增强。 ?→?*跃迁吸收峰发生红移。 饱和脂肪酸与醛相比，吸收峰发生红移 304 环己烷 1,3,5,7-辛四烯 n=4 258 正己烷 1,3,5-己三烯 n=3 217 正己烷 1,3-丁二烯 n=2 162 蒸汽 乙烯 n=1 ?max/nm 溶剂 化合物H(CH=CH)nH 2）共轭作用 不共轭双键不发生红移。 C=O双键同C=C双键的共轭作用使n→?*和?→?*跃迁的吸收峰都发生红移。 3）溶剂效应 极性溶剂使π-π*跃迁发生红移。 4）pH值 pH增大，苯酚π-π*吸收带发生红移。 由于n—π共轭参与，使分子整体共轭效应增强。 Note: 测UV-Vis应注明溶剂 5)取代基 苯环或烯烃（吸电子基）上的H被各种取代基取代，多发生红移。 6）空间异构 蓝移（紫移）：使化合物的吸收波长向短波方向移动效应。 影响蓝移因素： 1）溶剂效应 极性溶剂使n-π*跃迁发生蓝移 2）pH值 pH值减小，苯胺的π-π*吸收带蓝移n—π共轭参与少，使分子整体π共轭效应减少。 增强效应：吸收强度增强的现象； 减弱效应：吸收强度减弱的现象。 c．各类有机化合物的紫外吸收光谱 ①饱和化合物：σ→σ＊跃迁，λmax一般在150nm；当含有n电子的原子取代时产生n→σ＊跃迁，可使λmax增大，达到近紫外区(200~270nm)。 ②烯烃：有双键，产生π→π＊跃迁， λmax约在180nm；共轭体系中的π→π＊跃迁，对应K带吸收，ε大； π→π＊跃迁的λmax随共轭增长，移向长波方向，当有五个双键时， λmax达到可见光区。 ③醛酮：有＞C＝O基因，产生n→π＊； n→σ＊ ； π→π＊三种跃迁。 n→π＊跃迁吸收带对应R带，其ε小，λmax位于较长波方向(300nm左右)。α ,β-不饱和醛酮会使n→π＊与π→π＊发生红移。 ④芳香族：芳环共