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课时分层作业 四十 基 因 工 程
(30分钟 100)
1.(10分)启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体,,:
(1)____________________________。?
(2)将切割产生的DNA片段群体与无启动子的探针载体重组,________。?
(3)若把重组混合物转化给大肠杆菌,,_______。?
(4)若插入片段中所含的编码区序列的碱基对数目不能被3整除,??___
(5)若克隆位点插入了启动子序列,,,______________________________________。?
【解析】本题主要考查基因工程的工具和操作方法。
(1)限制性核酸内切酶具有酶的专一性,能识别并切割特定的脱氧核苷酸序列。
(2)将切割产生的DNA片段群体与无启动子的探针载体重组,可以用DNA连接酶连接二者之间的黏性末端。
(3)Ca2+可以增大细胞壁的通透性,提高转化效率。
(4)mRNA中相邻的三个碱基决定一个氨基酸,若插入片段中所含的编码区序列的碱基对数目不能被3整除,则与之相连的报告基因不能编码出正确的氨基酸序列,即不能正常表达。
(5)启动子插入克隆位点时有两种插入方向,若插入方向错误,则报告基因不能正常表达。
答案:(1)识别并切割特定的脱氧核苷酸序列
(2)DNA连接酶
(3)用Ca2+处理
(4)不能。mRNA中相邻的三个碱基决定一个氨基酸,若插入片段中所含的编码区序列的碱基对数目不能被3整除,则报告基因不能编码出正确的氨基酸序列
(5)启动子插入方向不正确
2.(10分)苦荞是一种有名的经济植物,CHS是合成黄酮类化合物的关键酶。有人把经修饰的CHS基因导入苦荞细胞中,:
(1)①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为____________________________。这种酶主要有两类,T4噬菌体中分离得到的,,________________。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的________键。?
(2)图中过程②操作前,Ca2+处理农杆菌,________细胞。?
(3)检测转基因苦荞培育是否成功,________________________________,________含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。?
【解析】(1)连接重组质粒需要DNA连接酶,从大肠杆菌中分离出的DNA连接酶称为E·coli DNA连接酶,DNA连接酶作用的对象为磷酸二酯键。
(2)Ca2+处理农杆菌,增加膜的通透性,使其成为感受态细胞,利于外源DNA进入。
(3)判断转基因苦荞培育是否成功,可以比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物的含量或细胞中CHS的含量。
答案:(1)DNA连接酶 E·coli DNA连接酶
磷酸二酯 (2)感受态
(3)转基因苦荞植株与普通苦荞植株都含有黄酮类化合物 黄酮类化合物
3.(15分)黑麦草中含有拮抗除草剂草甘膦的基因,,2015年8月,PCR技术(如图所示),:
(1)______________(填“cDNA文库”或“基因组文库”)中选取拮抗除草剂草甘膦的基因,PCR技术,A为__________。?
(2)基因工程操作的核心是____________________________。若需要对转入拮抗除草剂草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定,________实验。?
(3)若实验现象不理想,________工程设计和改造抗除草剂草甘膦的________。?
【解析】(1)拮抗除草剂草甘膦基因属于真核生物的基因,需从cDNA文库中获得。体外获得大量拮抗除草剂草甘膦基因要利用PCR技术,该技术的原理为DNA双链复制,延伸过程中以DNA每条链为模板,需要引物的加入。
(2)基因工程操作的核心是基因表达载体的构建。若需要对转入拮抗除草剂草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定,需要对玉米做喷洒草甘膦的实验。
(3)若想提高抗草甘膦酶活性需用蛋白质工程设计和改造抗除草剂草甘膦基因。
答案:(1)cDNA文库 引物
(2)基因表达载体的构建 喷洒草甘膦
(3)蛋白质 基因
【DNA复制与PCR技术的比较
4.(15分)(2018·石家庄模拟)苏云金芽孢杆菌产生的Bt毒蛋白在害虫的消化道内能被降解成有毒的多肽,,Bt基因广泛应用于培育转基因抗虫植物。
(1)培育转基因抗虫棉所需的目的基因来自________的基因组,PCR技术扩增。PCR反应中温度呈现周期性变化,90~95 ℃__________________,55~60 ℃DNA链结合,70~75 ℃,____________________________________________。?
(2)限制酶主要是从________中获得,DNA分子某种_____
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