种子活力的快速测定.ppt

植物生理学实验指导;实验十三种子生命力的快速测定 ; 种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。 测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。 但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。 ;Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法（TTC 法） ; 二、实验原理 凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲潜（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。 死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。 因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。 ; 三、实验材料、试剂与仪器设备 1.实验材料 玉米、小麦、花生等种子。 2.试剂 0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。 3.仪器设备 恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。 ; 四、实验步骤 1. 浸种 将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色 取吸胀的种子 40 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 40 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。 将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。 3. 计算活种子的百分率 如果可能的话与实际发芽率作一比较看是否??符？ ;Ⅱ 溴麝香草酚蓝法（ BTB 法） ; 二、实验原理 凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的 O2 放出 CO2， CO2 溶于水成为 H2CO3，H2CO3 解离成 H + 和 HCO3ˉ，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝（ BTB ）来测定酸度的改变。 BTB 的变色范围为 pH6.0 ～ 7.6 ，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH 7.1 ）。色泽差异显著，易于观察。 ; 三、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 :小麦种子。 （二）试剂 : 0.1% BTB 溶液： 称取 BTB 0.1 g ，溶解于煮沸过的自来水中（配制指示剂的水应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，蒸馏水为微酸性不宜用），然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色，可加数滴稀氨水，使之变为蓝色或蓝绿色。此液贮于棕色瓶中可长期保存。 （三）仪器设备 :恒温箱，天平，刀片，烧杯，镊子，培养皿，滤纸，漏斗。 ; 四、实验步骤 1. 浸种 同上述 TTC 法。 2. BTB 琼脂凝胶的制备 取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。 3. 显色 取吸胀的种子20粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少 l cm 。然后将培养皿置于 30 ～ 35 ℃下培养 1 ～ 2 小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 4. 计算活种子百分率 用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。 ;Ⅲ 红墨水染色法 ; 二、实验原理 有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的大红 G 不能进入细胞内，胚部不着色。 而丧失生活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内是胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。 ; 三、实验材料、试剂与仪器设备