钌(ⅱ)多吡啶配合物联合x射线照射对骨肉瘤细胞凋亡诱导作用的实验研究-脊柱外科专业论文.docxVIP

包括Bcl-2和Bax. Bcl-2是凋亡研究中最受重视的癌基因之一。目前临床上对于晚期骨肉瘤及手术后的骨肉瘤治疗方面，往往采用化疗、放疗、生物治疗等多手段的联合治疗方案。 本研究用不同浓度[Ru(dmb)2(DBHIP)](ClO4)2联合不同剂量的X射线对骨肉瘤MG-63细胞进行不同的时间处理后，观察其对骨肉瘤细胞生长抑制、诱导凋亡情况，并观察钌（Ⅱ）多 吡啶配合物对骨肉瘤MG-63细胞的放射治疗有无增敏作用，以求在骨肉瘤治疗方面有所新发 现。：研究钌（Ⅱ）多吡啶配合物对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的诱导作用，以及对骨肉瘤MG-63细胞的放射有无增敏作用，并对其作用机制进行初步的研究。：一、钌（Ⅱ）多吡啶配合物对骨肉瘤MG-63细胞的凋亡诱导作用的实验研究1、在培养液体系中加入不同浓度的钌（Ⅱ）多吡啶配合物[Ru(dmb)2(DBHIP)](ClO4)2对 骨肉瘤MG-63细胞进行处理，以CCK-8计数法测细胞生长曲线，并采用浓度梯度法计算药物的 LD50。2、细胞集落形成法观察细胞生长抑制情况，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况， Annexin V-FITC/PI双染色测细胞凋亡，Hoechst-33258染色观察细胞核的形态变化。二、不同剂量X射线照射处理对骨肉瘤细胞凋亡诱导作用的实验研究 1、对培养液体系中骨肉瘤MG-63细胞进行不同放射剂量的放射处理后继续培养，不同时间段后以CCK-8计数法测细胞生长曲线。 2、以细胞集落形成法观察细胞生长抑制情况，流式细胞仪检测细胞周期情况，Hoechst-33258染色观察细胞核的形态变化。 三、钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合放射处理对骨肉瘤MG-63细胞的凋亡诱导作用的实验研究1、对培养液体系中骨肉瘤MG-63细胞进行不同浓度的钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合不同放射剂量的处理，继续培养不同时间段后以CCK-8计数法测细胞生长曲线。2、以细胞集落形成法观察细胞生长抑制情况，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情 况，Wester-blot法测细胞凋亡情况，Hoechst-33258染色观察细胞核的形态变化。四、统计学分析：数据以均数±标准差(x±s)表示。全部数据经统计软件SPSS17．0处 理。采用重复测量设计的方差分析评价各组之间变化,多组间比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果：1、本文第一部分研究结果显示，浓度梯度法测得药物的LD50为175.7μmol/L。钌（Ⅱ） 多吡啶配合物能明显抑制骨肉瘤细胞生长，生长抑制率随着药物浓度的增大而增大。药物处 理后细胞周期的各时相比例发生了变化，较对照组呈现出明显的G1期阻滞。流式细胞仪检测 结果示药物能明显诱导MG-63细胞发生凋亡，并且呈浓度依赖效应，药物浓度越高，早期细 胞凋亡越明显。Hoechst-33258染色结果显示，对照组细胞在荧光显微镜下观察细胞核完整， 荧光成弥散状，比较黯淡，经钌（Ⅱ）多吡啶配合物处理的骨肉瘤细胞则染色质凝聚，细胞 核裂解，荧光比较明亮，证实钌（Ⅱ）多吡啶配合物能引起MG-63细胞DNA降解、细胞核破裂， 进而诱导人成骨肉瘤MG-63细胞走向凋亡。2、本文第二部分研究结果显示，经X射线照射后的骨肉瘤细胞表现出明显的生长抑制， 并呈时间和剂量依赖关系。10GYX射线处理4天后，细胞生长抑制率达到55.44%。随着照射剂 量的增加，细胞集落数明显减少。实验对照组、2GY、5GY、10GY处理细胞14天后，细胞集落 数均数分别为：（52±3.57）、（56±3.53）、（41±2.35）、（13±1.24），细胞集落的 贴壁率(%)分别为52%、28%、8.2%、1.3%。X射射线能够明显抑制骨肉瘤细胞的增殖，呈G2期 阻滞，并呈现剂量依赖效应，照射剂量越高细胞处在G2期的比例越高，由对照组的（3.84±0.15）%增加到2GY组的（8.46±0.14）%，再增加到5GY组的（13.19±0.07）%，增 加倍数分别为2.2、3.4倍。不同剂量放射处理组与对照组比较，差异均有显著性意义(均 P0.05)。Hoechst-33258染色结果显示未受处理组肿瘤细胞形态规则，染色质分布均匀， 核完整，经X射线照射后，在一定范围内，随着剂量增大，细胞凋亡越来越多，且凋亡细胞 的形态结构越发典型，表现为核固缩，染色质边集于核膜处，核小体形成等。3、本文第三部分研究结果显示：钌（Ⅱ）多吡啶配合物联合X射线组处理骨肉瘤细胞的 生长较单独处理组明显受抑制，并随着浓度的增加和时间的延长，差异性逐渐变大，表现出 明显的联合效应。细胞集落计数结果显示：随着药物浓度的增加和照射剂量的加大，细胞集 落数明显减少，百分比呈现明显的降低趋势。用150μmol/L联合5GY处理组，细胞集落的形 成的百分比为0.8%，与对照组56