限制性内切酶幻灯片.pptVIP

不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37oC，少数要求40-65oC。 酶 最适 温度oC 酶 最适 温度oC 酶 最适温度oC Apa I Bcl I Mae II Taq I 30 50 50 65 Apy I BstE II Mae III 30 60 55 Ban I Mae I Sma I 50 45 25 3. 温度 DNA分子的不同构型对限制性内切酶的活性也有很大的影响。某些限制性核酸内切酶切割超螺旋的质粒DNA所需要的酶量要比消化线性的DNA量高出很多倍。 是影响限制酶活性的重要因素。商品化的限制酶一般都带有专用缓冲液。 5. 缓冲液 化学组成 MgCl2、NaCl/KCl：提供Mg2+和离子强度 Tris-HCl：维持pH 二硫苏糖醇（DTT）：保持酶稳定性 牛血清白蛋白BSA等：有助于酶的稳定 如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为星号活性。 在低盐、高pH（8）时可识别和切割 GAATTA、AAATTC、GAGTTC等 GAATTC EcoR I： DNA重组 限制酶（物理）图谱绘制 突变分析（RFLP分析） 限制酶的部分酶切与完全酶切 * * 核酸内切酶分为单链DNA内切酶和双链DNA内切酶。能定点切割DNA双链的内切酶称为限制性内切酶。 限制：限制性内切酶将侵入细菌体内的外源D