他克莫司和地塞米松对肾小球足细胞trpc6表达和分布的影响-儿科学专业论文.docxVIP

英文缩写主要英文缩写英文全称中文全称MPC5mousepodocyte clone 5小鼠足细胞系SDslit diaphragm裂孔隔膜NFATGBMnuclearfactor of activatedTcellsglomerular basement menbrance活化态的T细胞核因子肾小球基底膜PANpuromycinaminonucleoside嘌呤霉素DEXdexamethasone地塞米松TRPC6transient receptor potentialchannel 6瞬时受体电位阳离子通道MCDminimal changedisease微小病变FSGSfocal segmental glomerulosclerosis局灶节段性肾小球硬化WBWestern Blot免疫蛋白印迹RT-PCRreverse transcription-polymerase chain逆转录聚合酶链反应PCRpolymerase chain reaction多聚合酶链式反应NSnephrotic syndrome肾病综合征ADNadriamycin-inducingnephrotic阿霉素肾病AngⅡangiotensinⅡ血管紧张素ⅡPI3Kphosphoinositide3-OHkinase磷脂酰肌醇3-激酶MGNmembranousglomerulonephritis膜性肾小球肾炎FK506tacrolimus他克莫司CNIcalcineurin inhibitors钙调磷酸酶抑制剂GRglucocorticoid receptor糖皮质激素受体GCglucocorticoid糖皮质激素他克莫司和地塞米松对肾小球足细胞TRPC6表达和分布的影响硕士研究生：马媛媛导师：于力教授中文摘要目的借助小鼠肾小球足细胞系（mousepodocyteclone 5, MPC5），观察嘌呤霉素（puromycinaminonucleoside,PAN)刺激足细胞及给予他克莫司（tacrolimus, FK506）和地塞米松（dexamethasone, DEX）干预后，足细胞分子瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transientreceptorpotentialcationchannel6,TRPC6）表达及分布的变化，探讨FK506和DEX对足细胞的保护作用及TRPC6与足细胞损伤修复的相关性。方法体外培养小鼠肾小球足细胞系（MPC5），设立对照组、PAN刺激组、FK506干预组和DEX干预组。对照组用含0.02%DMSO的RPMI1640培养液培养；PAN刺激组加入PAN(50μg/ml)刺激MPC5，FK506干预组同时加入PAN（50μg/ml）和FK506（10-6mol/L) ，DEX干预组同时加入PAN（50μg/ml）和DEX（10-6mol/L) 干预，分别于药物处理后8h、24h和48h观察细胞形态并收集细胞，采用MTT法检测各组足细胞活性、流式细胞仪检测足细胞凋亡率，RT-PCR和Westernblot分别检测TRPC6 mRNA和蛋白的表达，间接免疫荧光标记在共聚焦显微镜下观察TRPC6的分布。结果（1）正常足细胞呈星形，胞体大并伸出树枝样突起，相邻细胞间形成相互连接。PAN刺激后足细胞胞体明显缩小（p0.05），出现足突回缩、消失，失去细胞间连接；足细胞活性24h及48h均较对照组明显降低（p0.05），而凋亡率24h及48h均较对照组明显升高（p0.05），8h时TRPC6mRNA和蛋白的表达与对照组相比无明显差异（p0.05），24h和48h均显著升高（p0.01）；TRPC6的分布与对照组相比明显异常。（2）FK506及DEX干预后细胞胞体明显大于PAN刺激组（p0.05），大部分足细胞维持正常的足突形态；FK506及DEX干预24h和48h足细胞活性均较PAN刺激组明显升高(p0.05)，而凋亡率则均较PAN刺激组明显降低(p0.05)；FK506及DEX干预组8h时TRPC6 mRNA和蛋白的表达与PAN刺激组相比无明显差异（p0.05）；24h、48h时TRPC6 mRNA和蛋白的表达均较PAN 刺激组明显降低（p0.05）。TRPC6的分布与PAN刺激组相比明显改善，分布趋于正常。结论FK506、DEX可直接作用于足细胞，抑制PAN对足细胞结构的损伤，降低足细胞凋亡率，可能与FK506、DEX稳定足细胞分子TRPC6的表达和分布有关，从而维持裂孔隔膜（SD）结构和功能的完整性，发挥保护足细胞和抗蛋白尿的作用。关键词TRPC6；足细胞；他克莫司（FK506）；地塞米松（DEX）TacrolimusandDexamethasoneon expression and distribution ofTRPC6