罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐的制备及其抗氧化活性分析-水产品加工及贮藏工程专业论文.docxVIP

罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐的制备及其抗氧化活性研究摘要我国是世界上最大的罗非鱼养殖及出口国之一，在加工罗非鱼过程中会产生大 量罗非鱼下脚料，对其进行酶解得到的蛋白酶解液中含有丰富的氨基酸、小肽、微量 元素等多种高生物利用率小分子营养成分。本试验在课题组前期研究基础上，以高效 利用罗非鱼下脚料为出发点，制备罗非鱼下脚料蛋白多肽水解液。通过超滤得到具有 最佳螯合效果的组分并以其为原料制备锌螯合物，并对螯合工艺进行优化，将制备的 螯合盐纯化并研究其活性。希望充分利用鱼类精深加工的副产物，为海洋低值资源高 值化提供有效途径，为食品工业提供一种新型的，无毒害的天然生物抗氧化剂。试验 所得结论如下：1、获得最佳螯合效果的水解条件为：水解温度55℃，加酶量1500U/g，中性酶 与风味酶复合比1:2，固液比1:4，自然pH，水解时间30min，此时DH约15%。不 同超滤组分螯合能力不同，其中10KDa透过液(EH10K)螯合效果最好，螯合率为 89.36%，1KDa透过液螯合率较低为61.45%。所以本试验选用EH10K作为后续试验 原料。2、通过单因素实验初步确定罗非鱼下脚料酶解液超滤组分EH10K螯合锌的制备 工艺条件：配位比2.50：1，温度60℃，时间15min，pH7.0。在单因素的基础上，运 用二次回归正交旋转组合设计的方法，采用DesignExpert软件分析实验数据，得到 配位比(X1)、温度(X2)、时间(X3)、pH(X4)与螯合率(Y)的经验数学模型为：Y=87.59286+1.09375X1+0.72125X2+0.47375X3-0.87625X4+1.06938X2X3+1.3056334X2X4-1.39228X12-2.17853X22-1.81603X2-1.71728X2。确定的最佳螯合工艺条件为：配位比比2.70：1、温度71.3℃、时间15min、pH6.86， 在此条件下，锌螯合盐的螯合率达到 87.56%，其中，各个因素对螯合率影响大小的 顺序是：配位比＞pH＞温度＞时间。3、对比乙醇沉淀和透析两种方法对锌螯合盐的纯化效果。采用95%的乙醇一次 纯化所得的锌螯合盐(CH-Ⅰ)，螯合率达88.14%，游离氨基酸/水解氨基酸为20.58%； 使用截留分子量500Da的透析袋冰浴振荡纯化12h所得的锌螯合盐(CH-Ⅱ)，螯合率 为83.28%，游离氨基酸/水解氨基酸为23.93%。EH10K、CH-0、CH-Ⅰ和CH-Ⅱ层析 图表明，当EH10K与微量元素锌生成螯合盐后，出了较多的吸收峰，随着纯化的进I行，CH-Ⅰ与CH-Ⅱ吸收峰较CH-0有所减少，这说明纯化可以降低游离锌离子等杂质对层析的干扰。对EH10K及其螯合盐理化性质进行了研究，利用紫外吸收和傅立 叶红外光谱对EH10K、CH-0、CH-Ⅰ及CH-Ⅱ鉴定，结果显示，纯化后的螯合盐光 谱干扰性小，效果较好，能较好确认螯合物的形成，尤其是 CH-Ⅰ与CH-Ⅱ在波数 622.97cm-1 和618.80cm-1 吸收峰明显变大。4、研究EH10K及其锌螯合盐的抗氧化活性。EH10K、CH-0、CH-Ⅰ和CH-Ⅱ， 对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)的清除率随浓度增加逐渐增大， 其中对DPPH·自由基的IC50 依次为：6.79mg/mL、6.07mg/mL、3.76mg/mL、3.27mg/mL， 相当于0.10mg/mL 的GSH的清除能力；对·OH自由基的 IC50分别为：9.34mg/mL、 9.08mg/mL、8.27mg/mL、6.90mg/mL，CH-Ⅱ的清除能力最好。在油脂体系里，EH10K 对亚油酸的过氧化抑制率随浓度增大而增大，浓度为10mg/mL 时，抑制率达54.55%； 相同浓度下，CH-0、CH-Ⅰ、CH-Ⅱ对亚油酸的过氧化抑制率均高于EH10K，且均随 浓度增大先增后降，以CH-Ⅱ效果最明显，浓度为2.50mg/mL时，抑制率达78.25%。 在热诱导花生油、猪油的氧化体系中，EH10K及其锌螯合盐均显示了一定的氧化抑 制作用，部分样品效果略差于0.02%BHT。CH-Ⅱ的葡聚糖凝胶层析组分对 DPPH·与·OH 清除率的结果显示，分子量大组分(5383～9245Da)比分子量小组分 (1272～5383Da)的清除能力好。综上，CH-Ⅱ的抗氧化性优于EH10K、CH-0和CH-Ⅰ， 进一步体现了透析纯化的优势。 关键词：罗非鱼下脚料，酶解物，螯合，纯化，抗氧化活性StudyonthePreparationandProperties ofZincChelating ProteinHydrolysates fromTilapiaScrapsAbstractChinaisoneofthelarge