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2018-05-08 发布于河南
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实验：植物细胞的悬浮培养技术.ppt

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实验：植物细胞的悬浮培养技术

植物细胞的悬浮培养技术一、实验目的 1.掌握植物悬浮细胞系建立的方法，原理。 2. 巩固组织与细胞培养的无菌操作技术。二、实验原理将游离的植物细胞或小的细胞团置于液体培养基中进行培养和生长的一种技术，称为植物细胞悬浮培养。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织悬浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后，可形成分散县浮培养物。良好的悬浮培养物应具备以下特征：（1）主要有单细胞和小细胞团组成；（2）细胞具有旺盛的生长和分裂能力，增殖速度快；（3）大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征，它们多呈等径形，核质比率大，胞质浓厚，无液胞化程度较低。三、实验器材与材料器材超净工作台，酒精灯，镊子，高压灭菌锅材料前面实验诱导的豇豆的愈伤组织。四、实验方法 1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织(注意愈伤组织的选择)，放入试管中并轻轻夹碎。接种密度：每毫升培养基接0.1克愈伤组织。以保证最初培养物中有足够量的细胞。 2.将已接种的试管置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。 3.经6—10天培养后，若细胞明显增殖，可向培养瓶中加新鲜培养基4ml，必要时，可用移液管将培养物分装成两管，继续培养。（若细胞无明显增殖，可能是起始材料不适当，应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种）。可进行第一次继代培养。五、注意事项： 1.上述步骤均灭菌操作，培养基、用具、器皿等要高压灭菌后方可使用。2.如培养液混浊或呈现乳白色，表明已污染。 3.实验报告每人写一份。实验讨论部分记得首先评价自己之前培养的愈伤组织的生长情况。 * *