减毒麻疹活疫苗对小鼠的细胞遗传学效应.pdfVIP

遗 传 学 报， 17C4):269-275,1990 诵ctaCeneticaSinica 减毒麻疹活疫苗对小鼠的细胞遗传学效应 史庆华，） 施立 明 （中国科学院昆明动物研究所） 本文以C57BL/6J小鼠为材料，以骨髓细咆微核、染色体畸变和生殖细胞微核、染色体畸 变为指标，对国产减毒麻疹活疫苗的遗传安全性进行评价。结果表明，麻疹疫苗可引起小鼠骨 髓微核细胞率、染色体畸变率以及精细胞微核细胞率明显升高，与接种剂量和接种后的时间有 关；生殖细胞染色体畸变和对照比无显著性差异。 关键词：麻疹疫苗，小鼠，微核，染色体畸变 应用疫苗控制传染性疾病，是现代预防医学的一项重大成就。尤其是普遍接种牛痘 疫苗全球性消灭天花以后，这一措施更加激动人心1【1。随着疫苗种类、产量和接种人数的 增加，疫苗的遗传安全性也引起了人们的普遍关切。以麻疹疫苗为例，早在60年代，Auld (1965）和 Nichols(1966)扰分别发现，减毒麻疹活疫苗能诱发离体培养的人成纤维细饱 和接种者的外周淋巴细胞的染色体断裂。但也有其他工作显示，减毒麻疹活疫苗并不能 诱发接种者外周淋巴细胞染色体畸变[4.157。因此，在全国纷纷提出通过接种疫苗消灭麻疹 的计划之后，，〔，减毒麻疹活疫苗在遗传学上到底是否安全？尤其是对生殖细胞有无潜在 的遗传影响？就急待人们作出回答。本工作以C57BL/6J小鼠为材料，选择多项细胞遗 传学指标，试图对国产减毒麻疹活疫苗的遗传性安全进行初步的研究众 材 料 和 方 法 一（）实验材料 1．减毒麻疹活疫苗系成都生物制品研究所生产。批号度为2.7溶（于 1毫升双蒸水中）。 2.C57BL/6J小鼠，雄性，体重25-28克，约8周龄，由本所饲养场提供。80只小 鼠，按随机区组法，分成4组，每组20只，一次腹腔注射。接种剂量为：对照组每只动物 接种双蒸水0.2ml，实验组1,2,3分别接种滴度为2.7,3.0和3.3的病毒稀释液0.2ml/ 只。分别于注射后第1,3,7,15和30天取材。每组每次4只动物。 二（）实验方法 1．骨髓细胞微核测定 按常规方法制备骨髓细胞微核标本[6]［，观察统计多染性红 细胞、有核细胞的微核细胞率，结果以干分率表示。每只动物至少观察1000个细胞。 2．骨髓细胞染色体标本制备和畸变分析 按常规方法制备骨髓细胞染色体标本， 本文于1989年3月28日收到。 1)现通讯地址：安徽省职业病防治研究所 270 遗 传 学 报 17卷 参照Evans(1984）的描述迸行染色体畸变分析。每只动物至少分析50个细胞。 3.精细胞微核测定 取1只皋丸，去除白膜。于盛有0.9多生理盐水的小瓶中剪 碎。静置约15分钟，吸取上清液于离心管中，离心 7（00转／分）7分钟，弃上清液，加少 量血清制成细胞悬浮液，涂片。甲醇固定15分钟，以pH6.8磷酸盐缓冲液稀释10倍的 Giemsa染色20分钟。选择细胞分布良好的区域，观察统计精细胞微核细胞率。每只动 物至少观察1000个细胞，结果以千分率表示。 各类生精细胞的区分与精细胞微核的鉴别，基本参照曾小鲁等 （1982）的描述。精原 细胞较小，细胞核染色均匀，染色较浅，由于紧密附着在精小管管壁上，不易脱落，制片中 这类细胞极少；初级精母细胞最大，细胞核染色较深，且染色很不均匀；次级精母细胞较 小，细胞核染色深，核质比小。精细胞最小，细胞核染色最深且均匀，核质比大。精细胞微 核的鉴别标准为：小于主核的三分之一，和主核完全脱离；与主核染色相同或较深，和主 核在同一平面上。 4．减数分裂染色体标本制备和畸变分析 参照施立明 （1985）的报道，取另1只肇 丸，制备减数分裂染色体标本。根据 Evans(1984）和 Adler(1982）的描述观察精原 细胞染色单体断裂、断片的出现率。参照 Adler(1982）和 Searle(1986）的描述，观察 统计精母细胞中期I染色体断裂、断片和易位多价体的出现率。精母细胞中期II染色体 畸变